[發(fā)明專利]測定人體胃泌素G17含量的磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011391200.6
• 申請日: 2020-12-02
• 公開（公告）號: CN112684166A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 路鵬曉;王鵬;王海森
• 申請（專利權(quán)）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 天津翰林知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12210
• 代理人: 付長杰

1.一種測定人體胃泌素G17含量的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測試劑盒，包括：磁分離試劑、R1試劑、R2試劑、校準(zhǔn)品液系列和化學(xué)發(fā)光底物液；R2試劑為堿性磷酸酶標(biāo)記的胃泌素G17單克隆抗體稀釋液，化學(xué)發(fā)光底物液為堿性磷酸酶催化發(fā)光的底物液，R1試劑為樣品稀釋液，校準(zhǔn)品液系列為含有不同濃度胃泌素G17抗原的稀釋液；其特征在于，所述磁分離試劑為包被胃泌素G17單克隆抗體的免疫磁珠，

所述包被胃泌素G17單克隆抗體的免疫磁珠包被方法是：

(1)洗滌磁珠：取100mg/mL的磁珠100uL，加入0.1M的MES緩沖液1mL，混勻5分鐘，磁分離，去上清，重復(fù)洗滌3次；

(2)活化：取洗滌完成的磁珠，加入20mg/mL、50uL EDC溶液及20mg/mL、50ulNHS溶液，充分混勻，室溫振蕩反應(yīng)2h；

(3)活化后洗滌：反應(yīng)結(jié)束后，磁分離，去上清，用MES溶液重懸洗滌3次；

(4)包被：向洗滌完成的磁珠中加入用0.05M硼酸緩沖液稀釋后的胃泌素G17單克隆抗體，充分混勻，37℃搖床孵育18h；

(5)封閉：將孵育后的磁珠磁分離，去上清，加入1mL封閉液，混勻5分鐘，磁分離，去上清，重復(fù)洗滌3次，得到包被胃泌素G17單克隆抗體的免疫磁珠，濃度為10mg/mL；

(6)定容：用封閉液最終定容到10mL，濃度為1mg/mL，置于2-8℃平衡24h，得到胃泌素G17單克隆抗體包被的磁分離試劑；

所述封閉液為pH值為7.0～8.0，包括：PBS，濃度為0.02M；摩爾濃度為1M的氯化鎂溶液；摩爾濃度為0.1M的氯化鋅；牛血清白蛋白，濃度為10.0～50.0g/L；蔗糖，濃度為20.0～100.0g/L；Proclin300，濃度為1.05～4.20g/L；Bronidox，濃度為1.05～4.20g/L；其余組分為去離子水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉液中還包括濃度為10.0～20.0g/L的甘油。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉液pH值為7.4，包括：PBS，濃度為0.02M；摩爾濃度為1M的氯化鎂溶液；摩爾濃度為0.1M的氯化鋅；牛血清白蛋白，濃度為10.0g/L；蔗糖，濃度為100.0g/L；甘油，濃度為20.0g/L；Proclin300，濃度為2.1g/L；Bronidox，濃度為2.1g/L；其余組分為去離子水。

4.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑為含阻斷劑的樣品稀釋液，pH值為5.8～8.5，包括：Tris，濃度為5.98～6.52g/L；Proclin-300，濃度為0.98～1.99g/L；氯化鈉，濃度為8.5～9.5g/L；牛血清白蛋白，濃度為10～30g/L；EDTA-2Na，濃度為1～10g/L；阻斷劑，濃度為50～200ug/mL；其余為去離子水；

優(yōu)選地，所述R1試劑為含阻斷劑的樣品稀釋液，pH值為7.4，包括：Tris，濃度為6.05g/L；Proclin-300，濃度為1.99g/L；氯化鈉，濃度為9g/L；牛血清白蛋白，濃度為10g/L；EDTA-2Na，濃度為2g/L；阻斷劑，濃度為100ug/mL；其余為去離子水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R2試劑即堿性磷酸酶標(biāo)記的胃泌素G17單克隆抗體稀釋液是由用SMCC活化的堿性磷酸酶與2-亞氨基硫烷鹽酸鹽活化的胃泌素G17單克隆抗體按照摩爾比混合均勻進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)后，使用Tris緩沖液平衡，凝膠柱進(jìn)行不同分子大小片段的分離純化，制得堿性磷酸酶標(biāo)記的胃泌素G17標(biāo)記抗體。