[發(fā)明專利]人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47及其編碼基因與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810305139.1
• 申請日: 2008-10-24
• 公開（公告）號: CN101724041A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建遠(yuǎn)
• 申請（專利權(quán)）人: 李建遠(yuǎn)
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C07K16/18;A61K38/17;A61K31/7088;A61K48/00;A61K35/12;A61P15/16;A61P31/00;G01N33/53
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明涉及一種新的人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47及其編碼基因與應(yīng)用

背景技術(shù)

本世紀(jì)人類的發(fā)展面臨著兩個(gè)嚴(yán)峻的問題：一方面，全球人口在急速膨脹，預(yù)計(jì)在2050年將達(dá)到90億；另一方面，據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查，大約15％的夫婦存在著不育問題，發(fā)達(dá)國家不育癥的發(fā)病率在最近10年飚升，歐洲發(fā)達(dá)國家可高達(dá)30％，其中男性因素約占一半。世界衛(wèi)生組織預(yù)測，隨著環(huán)境污染和性傳播疾病等致病因素的增加，本世紀(jì)，不育癥將成為僅次于腫瘤和心腦血管病的第三大疾病。但男性不育并未引起社會(huì)和醫(yī)學(xué)界的足夠重視，因此有關(guān)男性生殖健康的研究進(jìn)展緩慢，明顯落后于其它學(xué)科。缺少分子生物學(xué)層面診斷與治療不育癥的有效方法。由于精子發(fā)育障礙不能自然受精，需要醫(yī)生通過做試管嬰兒獲取后代。利用此種技術(shù)獲取后代，不僅耗費(fèi)了寶貴的時(shí)間與資金，而且存在很多影響健康的潛在因素，失去了正常生育過程中精卵天然結(jié)合、優(yōu)勢選擇遺傳后代的機(jī)會(huì)。給家庭與社會(huì)帶來了沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

全世界人口的急劇增長造成了資源耗竭和環(huán)境惡化，成為人類健康與生存的嚴(yán)重威脅。當(dāng)前世界人口已超過60億，據(jù)專家估計(jì)，中國資源環(huán)境能支撐的最大人口容量為15-16億。目前可供人類選擇的避孕措施還很有限，離“高效、安全、可逆”的標(biāo)準(zhǔn)還相差較遠(yuǎn)。發(fā)展安全有效、先進(jìn)實(shí)用的避孕節(jié)育新技術(shù)、新產(chǎn)品，以滿足不同人群、不同層次的避孕用藥的個(gè)性化要求是近年來國內(nèi)外避孕節(jié)育技術(shù)發(fā)展的總趨勢。

附睪是精子成熟的重要器官，睪丸產(chǎn)生的精子需要通過與附睪管腔微環(huán)境相互作用才能獲得運(yùn)動(dòng)、受精、防御和維持正常胚胎發(fā)育以及防御等生物學(xué)功能。附睪內(nèi)大約有200余種分泌蛋白與精子相互作用，參與精子成熟過程，但是人們對這些蛋白的功能知之甚少。與精子成熟相關(guān)的附睪蛋白的研究將有助于推動(dòng)男性生殖醫(yī)學(xué)的研究進(jìn)展，為男性不育癥的診斷和治療以及開發(fā)新型避孕藥物提供侯選分子靶標(biāo)，同時(shí)有可能對附睪環(huán)節(jié)的男性避孕帶來新的思路和突破。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種新的人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47。

一種人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47，它具有序列表中序列2的氨基酸序列或?qū)⑿蛄?的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2的氨基酸殘基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白質(zhì)或多肽。

本發(fā)明的人附睪分泌蛋白命名為：HEL-47，由654個(gè)氨基酸殘基組成。HEL-47蛋白存在有2個(gè)cAMP、cGMP依賴性的蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)，8個(gè)N-十四烷酰基化位點(diǎn)和22個(gè)磷酸化位點(diǎn)，包括14個(gè)酪蛋白激酶II磷酸化位點(diǎn)以及6個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，2個(gè)酪氨酸激酶磷酸化位點(diǎn)，2個(gè)熱休克蛋白70標(biāo)簽位點(diǎn)。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供編碼人類附睪表達(dá)蛋白HEL-47的基因。它是下列核苷酸序列之一：

序列表中序列1的DNA序列，GenBank注冊號為：EU668321；

編碼序列表中SEQ?ID?No.2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；

與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列。

序列表中的SEQID?No.1，全長cDNA序列為2007bp，定位于人1號染色體上，編碼654個(gè)氨基酸，編碼蛋白為HEL-47，含有信號肽，其開放閱讀框?yàn)?008bp，是一個(gè)完整的讀碼框。

本發(fā)明的第三方面，提供了采用基因工程技術(shù)制備具有人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47活性多肽的方法，它包括含有上述多核苷酸序列的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的第四方面，提供了與上述人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47特異性結(jié)合的抗體，以及由此開發(fā)的用于附睪功能異常所致的不育癥的輔助診斷。

本發(fā)明的第五方面，提供了檢測樣本中是否存在人類附睪表達(dá)精子結(jié)合蛋白HEL-47的方法，它包括：將待測樣品與分泌蛋白的特異性抗體在一定條件下共同作用，觀察是否形成抗原抗體復(fù)合物，有抗原抗體復(fù)合物形成就提示樣品中存在分泌蛋白。