[發明專利]人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9及其編碼基因與應用

無效

• 申請號: 200810305128.3
• 申請日: 2008-10-24
• 公開（公告）號: CN101724032A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 李建遠
• 申請（專利權）人: 李建遠
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C07K16/18;A61K38/17;A61K31/7088;A61K48/00;A61K35/12;A61P15/16;A61P31/00;G01N33/53
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技術領域

本發明屬于生物技術與醫學領域。具體地說，本發明涉及一種新的人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9及其編碼基因與應用

背景技術

本世紀人類的發展面臨著兩個嚴峻的問題：一方面，全球人口在急速膨脹，預計在2050年將達到90億；另一方面，據世界衛生組織調查，大約15％的夫婦存在著不育問題，發達國家不育癥的發病率在最近10年飚升，歐洲發達國家可高達30％，其中男性因素約占一半。世界衛生組織預測，隨著環境污染和性傳播疾病等致病因素的增加，本世紀，不育癥將成為僅次于腫瘤和心腦血管病的第三大疾病。但男性不育并未引起社會和醫學界的足夠重視，因此有關男性生殖健康的研究進展緩慢，明顯落后于其它學科。缺少分子生物學層面診斷與治療不育癥的有效方法。由于精子發育障礙不能自然受精，需要醫生通過做試管嬰兒獲取后代。利用此種技術獲取后代，不僅耗費了寶貴的時間與資金，而且存在很多影響健康的潛在因素，失去了正常生育過程中精卵天然結合、優勢選擇遺傳后代的機會。給家庭與社會帶來了沉重的精神和經濟負擔。

全世界人口的急劇增長造成了資源耗竭和環境惡化，成為人類健康與生存的嚴重威脅。當前世界人口已超過60億，據專家估計，中國資源環境能支撐的最大人口容量為15-16億。目前可供人類選擇的避孕措施還很有限，離“高效、安全、可逆”的標準還相差較遠。發展安全有效、先進實用的避孕節育新技術、新產品，以滿足不同人群、不同層次的避孕用藥的個性化要求是近年來國內外避孕節育技術發展的總趨勢。

附睪是精子成熟的重要器官，睪丸產生的精子需要通過與附睪管腔微環境相互作用才能獲得運動、受精、防御和維持正常胚胎發育以及防御等生物學功能。附睪內大約有200余種分泌蛋白與精子相互作用，參與精子成熟過程，但是人們對這些蛋白的功能知之甚少。與精子成熟相關的附睪蛋白的研究將有助于推動男性生殖醫學的研究進展，為男性不育癥的診斷和治療以及開發新型避孕藥物提供侯選分子靶標，同時有可能對附睪環節的男性避孕帶來新的思路和突破。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種新的人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9。

一種人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9，它具有序列表中序列2的氨基酸序列或將序列2的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與序列2的氨基酸殘基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白質或多肽。

本發明的人附睪分泌蛋白命名為：HEL-9，由501個氨基酸殘基組成。HEL-9蛋白存在有2個Amidation位點，2個N糖基化位點，6個N-十四烷酰基化位點和13個磷酸化位點，包括1個cAMP和cGMP依賴的蛋白激酶磷酸化位點，5個酪蛋白激酶II磷酸化位點和6個蛋白激酶C磷酸化位點，1個酪氨酸激酶磷酸化位點。而且，分子中含有2個Aldehyde?dehydrogenasescysteine活性位點。

本發明的第二個目的是提供編碼人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9的基因。它是下列核苷酸序列之一：

序列表中序列1的DNA序列，GenBank注冊號為：EU668318；

編碼序列表中SEQ?ID?No.2蛋白質序列的多核苷酸；

與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質的DNA序列。

序列表中的SEQID?No.1，全長cDNA序列為2105bp，定位于人9號染色體上，編碼501個氨基酸，編碼蛋白為HEL-9，不含有信號肽，其開放閱讀框為1506bp，是一個完整的讀碼框。

本發明的第三方面，提供了采用基因工程技術制備具有人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9活性多肽的方法，它包括含有上述多核苷酸序列的載體，以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞。

本發明的第四方面，提供了與上述人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9特異性結合的抗體，以及由此開發的用于附睪功能異常所致的不育癥的輔助診斷。

本發明的第五方面，提供了檢測樣本中是否存在人類附睪表達精子結合蛋白HEL-9的方法，它包括：將待測樣品與分泌蛋白的特異性抗體在一定條件下共同作用，觀察是否形成抗原抗體復合物，有抗原抗體復合物形成就提示樣品中存在分泌蛋白。