[發明專利]一種沙丁胺醇的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200810249803.5
• 申請日: 2008-12-29
• 公開（公告）號: CN101446589A
• 公開（公告）日: 2009-06-03
• 發明（設計）人: 郗日沫;劉偉;尹偉偉;李偉華;丁鍇;劉中秋
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 程凌軍

技術領域

本發明涉及一種酶聯免疫檢測試劑盒，尤其涉及一種沙丁胺醇的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒。

背景技術

沙丁胺醇屬于β—興奮劑，β—興奮劑是一類化學合成的苯乙醇胺類衍生物。β—興奮劑作用機理和腎上腺素、去甲腎上腺素相同，可影響營養物質在動物體內的流向和重新分配，有效促進肌肉組織生長，降低胴體脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉產量，因而曾在歐美廣泛使用。運動員使用此藥，可以增加肌肉和肺活量，縮短高強度訓練后的恢復期。但另一方面，β—興奮劑具有類似腎上腺素的化學結構，而且這類化合物作為促生長劑的用量一般較高，一般為治療用量的5-10倍。事實表明此類藥物不易破壞，如果在屠宰前沒有經過一定時間的休藥期，則在肌肉和內臟器官會殘留較高濃度的藥物。如果人食用了含有這些殘留藥物的可食性組織，這些藥物就能與細胞表面的β—受體結合而產生明顯的生理作用，如心悸、頭疼、目眩、惡心、嘔吐、戰栗、神經過敏、血管擴張、心率加快等，尤其是對高血壓、心臟病、糖尿病、甲亢患者危害更大，嚴重的可導致死亡。因此為了保證消費者的安全，目前歐美各國均禁止其在畜牧生產上的應用。但還是有某些國家和地區的飼養者在食用性動物喂養中添加沙丁胺醇，導致相關動物性食品中有沙丁胺醇殘留，因此定期對沙丁胺醇殘留進行檢測成為許多國家的監控的必要手段。

目前，檢測沙丁胺醇的方法主要有：微生物法、薄層色譜法(TLC)、放射免疫法，高效液相色譜法(HPLC)、色/質聯用分析法(LC-MS)、液/質聯用分析法(LC-MS/MS)。微生物法的缺陷是：費時而且缺乏特異性。薄層色譜法的缺陷是：操作過程復雜，時間長；操作人員需要經過專業培訓；影響分析的干擾因素較多，結果重復性差。薄層色譜法、放射免疫法，高效液相色譜法、色/質連用分析法、液/質聯用分析法這些理化方法的缺陷是儀器設備昂貴，樣品前處理復雜，費時，費力，不易普及，檢測費用高，特別是放射免疫法還需要配備放射源，有一定危險性。鑒于此，建立一種有效、快速、簡單、靈敏的檢測沙丁胺醇的方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種沙丁胺醇的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒。該試劑盒具有檢測靈敏度高、應用靈活、方便的特點。

本發明所述沙丁胺醇的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內的沙丁胺醇的多克隆抗體、辣根過氧化酶標記的羊抗兔的抗體、沙丁胺醇系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、發光液；其特征在于：

所述酶標板的各孔包被有以克倫特羅與卵清蛋白偶聯制成的包被抗原；其中所述包被抗原濃度優選2.5μg/mL。

所述酶標板優選乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光酶標板。

所述卵清蛋白的分子量范圍優選6.7KDa～6.8KDa。

所述沙丁胺醇系列標準溶液分別是0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL。

所述酶標羊抗兔抗體為辣根過氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作濃度優選為1∶1000。

所述沙丁胺醇抗體是由沙丁胺醇與分子量范圍是6.7KDa～6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫動物制得的多克隆抗體，其工作濃度優選為1∶1000。

所述發光液是0.01M魯米諾與0.001M對甲苯酚的三(羥甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(體積比)H₂O₂的混合液。所述魯米諾為發光底物，對甲苯酚為發光增強劑。

所述洗滌溶液是含有體積分數0.05％吐溫-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液。

所述包被溶液是每升水中含1.59g碳酸鈉和2.53g碳酸氫鈉的溶液，pH為9.5。

所述封閉溶液是每升洗滌溶液中含10g卵清蛋白(OVA，ovalbumin，也稱雞卵清白蛋白或雞卵白蛋白，由386aa組成，分子量約43Kd)且加入重量分數0.5％?NaN₃的溶液。

本發明試劑盒最大檢測范圍為0.1ng/mL～5ng/mL。

本發明試劑盒中涉及的沙丁胺醇標準溶液、酶標羊抗兔抗體溶液、沙丁胺醇抗體溶液、發光溶液及洗滌溶液及其配方對本發明試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、沙丁胺醇標準溶液：以常規方法配制濃度分別為0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL的沙丁胺醇標準溶液。