[發(fā)明專利]一種重組表達(dá)載體的基因序列及其構(gòu)建方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810249705.1
• 申請(qǐng)日: 2008-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN101492685A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡成進(jìn);李傳芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 胡成進(jìn);李傳芬
• 主分類號(hào): C12N15/31
• 分類號(hào): C12N15/31;C12N15/70;C07K14/31;C07K16/12
• 代理公司: 濟(jì)南信達(dá)專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 姜 明

1、一種重組表達(dá)載體的基因序列，其特征在于該重組表達(dá)載體的基因序列中含有能夠表達(dá)金黃色葡萄球菌nEbpS蛋白的基因序列。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組表達(dá)載體的基因序列，其特征在于該重組表達(dá)載體的基因序列具有序列表中SEQ?ID?NO.4所述的堿基序列。

3、該重組表達(dá)載體的基因序列的構(gòu)建方法，其特征在于構(gòu)建方法的步驟包括：

(1)根據(jù)Genbank中ATCC25923標(biāo)準(zhǔn)菌株nEbpS基因序列，合成在5’端引入BamH?I酶切位點(diǎn)的具有序列表中SEQ?ID?NO.1所述的堿基序列的上游引物；合成在5’端引入HindIII酶切位點(diǎn)的具有序列表中SEQ?ID?NO.2所述的堿基序列的下游引物；

(2)采用高保真酶、上游引物和下游引物利用PCR方法從金黃色葡萄球菌ATCC25923標(biāo)準(zhǔn)菌株基因組中擴(kuò)增出nEbpS蛋白目的基因；

(3)PCR產(chǎn)物的回收和純化；

(4)PCR產(chǎn)物的雙酶切處理和純化；

(5)克隆載體的雙酶切處理及純化；

(6)目的片段與克隆載體的連接；

(7)連接產(chǎn)物誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞感受態(tài)；

(8)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞，篩選、鑒定、擴(kuò)培，抽提得重組質(zhì)粒；

(9)重組質(zhì)粒雙酶切處理和純化；

(10)表達(dá)載體雙酶切處理和純化；

(11)目的片段與表達(dá)載體的連接，得重組表達(dá)載體。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體的基因序列的構(gòu)建方法，其特征在于克隆載體采用pMD19-T。

5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體的基因序列的構(gòu)建方法，其特征在于宿主細(xì)胞選用DH5α大腸桿菌。

6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體的基因序列的構(gòu)建方法，其特征在于所述的篩選是對(duì)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞進(jìn)行氨芐青霉素抗性菌株的篩選。

7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體的基因序列的構(gòu)建方法，其特征在于表達(dá)載體采用pQE30。