[發(fā)明專利]褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞系的構(gòu)建方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810249566.2
• 申請(qǐng)日: 2008-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN101451122A
• 公開（公告）日: 2009-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊廷俊;魏云波;姜國(guó)建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/06
• 分類號(hào): C12N5/06
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張中南

1.一種褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞系的構(gòu)建方法，首先將鮮活褐點(diǎn)石斑魚暫養(yǎng)于濃度均為1000單位／毫升的青霉素和鏈霉素的高雙抗海水中消毒處理，24?小時(shí)后以75％酒精再次消毒，置于超凈工作臺(tái)中解剖取下鰾組織，用磷酸鹽緩沖液漂洗后剪成大致1mm³?的組織塊；離心收集的鰾組織塊則用含有5％胎牛血清和0.05?‰?-0.15?‰的羧甲基殼寡糖的pH?值為7.0-7.4的DMEM?/?F12?培養(yǎng)液充分懸浮，均勻接種于使用0.01％明膠進(jìn)行預(yù)處理的25毫升培養(yǎng)瓶中，22-24℃?下正置干貼16-20?小時(shí)后，每瓶加入5毫升褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液，置22-24℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-5天吸出2.5?毫升上述25?毫升培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，再添加2.5?毫升上述褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液；待褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，使用濃度為0.1％-0.3％胰蛋白酶溶液消化，按1?瓶傳2?瓶的方式進(jìn)行傳代培養(yǎng)；所述的褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液配方為含有20％胎牛血清和0.05‰-0.15‰比例的羧甲基殼寡糖、pH?值為7.0-7.4?的DMEM?/?F12?培養(yǎng)液。

2.如權(quán)利要求1?所述的細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征是在上述褐點(diǎn)石斑魚鰾細(xì)胞專用增殖培養(yǎng)液中又添加占該培養(yǎng)液0.?01‰-0.02‰比例的人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、0.02‰-0.04‰比例的I?型人胰島素樣生長(zhǎng)因子和0.05‰-0.15‰?的N-乙酰葡萄糖鹽酸鹽。?