[發(fā)明專利]氨基酸診斷/測(cè)定試劑(盒)及氨基酸濃度測(cè)定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810244218.6
• 申請(qǐng)日: 2008-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN101750358A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/17;G01N33/48;C12Q1/26
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種氨基酸診斷/測(cè)定試劑(盒)，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定氨基酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

氨基酸含量的測(cè)定在醫(yī)學(xué)/食品/工業(yè)/農(nóng)業(yè)/環(huán)境中都是比較重要的測(cè)定項(xiàng)目。現(xiàn)有的測(cè)定方法有色譜法、電化學(xué)法、儀器分析法(氨基酸分析儀)、分光光度計(jì)等方法，這些方法或是操作方法較為繁雜、特異性差、或儀器設(shè)備成本較高等缺點(diǎn)。

氨基酸不是單純的一種物質(zhì)，用氨基酸分析儀可直接測(cè)定出17種氨基酸(儀器價(jià)格昂貴，不能普遍使用)，對(duì)于醫(yī)學(xué)/食品/工業(yè)/農(nóng)業(yè)/環(huán)境中來說，多數(shù)情況下，都是很多種氨基酸同時(shí)存在，所以需要測(cè)定總的氨基酸含量，它們不能以氨基酸百分率來表示，只能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。

大量食肉或饑餓時(shí)尿中氨基酸氮增加，孕婦及新生兒尿液氨基酸氮也增加。氨基酸代謝異常，造成某些氨基酸在體內(nèi)積累過多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎縮、肝功能衰竭、Reye綜合征、或某些因素造成蛋白質(zhì)分解加速的疾病，遺傳性疾病所導(dǎo)致的代謝異常均可使尿中氨基酸氮增加。

酶法測(cè)定血、尿、體液、食品、土壤、工業(yè)產(chǎn)品中氨基酸氮含量具有特異性高、方法簡(jiǎn)便、成本低的特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶循環(huán)擴(kuò)增法(EnzymaticRecycling?Method)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測(cè)還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，得以測(cè)定氨基酸濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的氨基酸診斷/測(cè)定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行氨基酸濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明氨基酸濃度測(cè)定方法如下：

氨基酸+水+氧氨基酸氧化酶氧代酸+氨+過氧化氫

氨+(吲哚-3-基)丙酮酸+還原型輔酶色胺酸脫氫酶/Ca²⁺色胺酸+輔酶

這種方法應(yīng)用氨基酸氧化酶(amino-acid?oxidase；EC?1.4.3.2；EC?1.4.3.3)酶(偶)聯(lián)色胺酸脫氫酶(Tryptophan?dehydrogenase；EC?1.4.1.19)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法。氨基酸氧化酶作為作用酶，功能為將氨基酸酶解產(chǎn)生氨。色胺酸脫氫酶作為循環(huán)酶：色胺酸脫氫酶的酶促作用使氨變成色胺酸(一種氨基酸)，使色胺酸(氨基酸)不斷地被重復(fù)循環(huán)利用。色胺酸脫氫酶又作為顯色酶，將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為氧化型輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測(cè)量340nm處吸光度下降的速度，可以測(cè)算氨基酸的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明氨基酸診斷/測(cè)定試劑(盒)較為理想：

緩沖液????100mmol/L

穩(wěn)定劑????500mmol/L

還原型輔酶???????????0.25mmol/L

氨基酸氧化酶?????????6000U/L

色氨酸脫氫酶?????????8000U/L

(吲哚-3-基)丙酮酸????12mmol/L

氯化鈣???????????????5mmol/L

本發(fā)明的氨基酸診斷/測(cè)定試劑(盒)可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、氨基酸氧化酶、色氨酸脫氫酶、(吲哚-3-基)丙酮酸、氯化鈣。

試劑(盒)可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、(吲哚-3-基)丙酮酸、氯化鈣。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶、色氨酸脫氫酶。

還原型輔酶、氨基酸氧化酶、色氨酸脫氫酶、(吲哚-3-基)丙酮酸、氯化鈣在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑(盒)可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1