[發(fā)明專利]肌酐診斷/測定試劑(盒)及肌酐濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810244200.6
• 申請日: 2008-12-10
• 公開（公告）號: CN101750351A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/17;G01N33/48;C12Q1/26
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種肌酐診斷/測定試劑(盒)，同時本發(fā)明還涉及測定肌酐濃度的方法，屬于醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

測定肌酐主要有化學測定法(Jaffe法)、酶法、高效液相層析法和毛細管電泳法等。

化學測定法成本低廉，操作簡便，是目前國內(nèi)測定肌酐最常用的方法之一。標本中的肌酐與苦味酸鹽作用生成黃紅色的苦味酸肌酐復合物。此法的缺點是特異性不高，維生素C、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴以及高濃度葡萄糖、蛋白質(zhì)和一些抗生素如青霉素G、頭孢西丁、頭孢唑啉等也能與堿性苦味酸反應生成紅色。

高效液相層析法(HPLC)，肌酐在弱酸性環(huán)境中帶正電荷，通過陽離子交換層析柱可與其他成分很好分離，在234nm測定其光吸收。此法分析的精密度高、特異性好，但本法不適于大批量臨床標本分析，通常作為肌酐測定的參考方法，用于評價市售肌酐測定的試劑盒和某些科研目的。檢索發(fā)現(xiàn)，申請?zhí)枮?0106198.0、申請日為1990.12.18的中國專利申請公開了用高效液相色譜直接測定人尿中假尿嘧啶核苷(簡稱假尿苷)，再通過分光光度法同時測出肌酐，分別用假尿苷和假尿苷/肌酐作為鼻咽癌和肺癌的標志物。(這個專利和我們的無關(guān))

毛細管電泳法，血清標本用高速離心作預處理，尿液標本可用低速離心，除去有形成分，上清液用膠束動電毛細管電泳分離后測定235nm處吸光度。本法測定線性范圍寬，操作較為簡便，但需用特殊設備和進行血清標本的預處理，臨床常規(guī)使用困難。

酶學測定法主要有肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deiminase)和肌酐酶(Creatininase)兩大類。

檢索發(fā)現(xiàn)，申請?zhí)枮?2139298.6、申請日為2002.11.15的專利申請公開了應用酶反應產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶配制的測定試劑。該發(fā)明所指的酶法測定試劑并不加入測定反應所需的還原型煙酰胺輔酶或其類似物，而加入其反應產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶或其類似物及其相應的生成還原型輔酶所需的酶和底物系統(tǒng)，通過在試劑內(nèi)形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反應系統(tǒng)，將這類氧化型輔酶或其類似物緩慢循環(huán)還原為還原型煙酰胺輔酶或其類似物，當被還原的還原型煙酰胺輔酶或其類似物達到一定的濃度時，該發(fā)明所指的酶法試劑就可達到測定樣本中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的目的。該發(fā)明的特點在于為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等的測試提供一個內(nèi)源合成丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等反應所需要的底物-還原型煙酰胺輔酶。其缺點之一為，這個系統(tǒng)在生成反應所需要的還原型煙酰氨輔酶的同時，也抵消了部分丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的活性，造成試劑測試的準確性大大降低。其缺點之二是，該試劑在正式測試前必須事先反應一段時間，以便能夠產(chǎn)生足夠的還原型煙酰氨輔酶，這樣一來就造成了緩不濟急的結(jié)果，給測試帶來很大的不便。

據(jù)申請?zhí)枮?2139298.6、申請日為2002.11.15的專利介紹，該系統(tǒng)由于不斷生成測定所需的NADH或NADPH，從而大大提高了試劑的穩(wěn)定性，并大大降低試劑的生產(chǎn)成本。其實在試劑中加入NADH或NADPH的穩(wěn)定劑已經(jīng)不是困難或增加成本的問題，反而比在試劑中增加一個反應系統(tǒng)要經(jīng)濟得多。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定肌酐濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的肌酐診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行肌酐濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發(fā)明肌酐濃度測定方法如下：

肌酐+水肌酐脫亞胺酶N-甲基海因+氨

氨+過氧化氫+2-酮戊二酸谷氨酸氧化酶谷氨酸+氧+水

谷氨酸+輔酶谷氨酸合成酶谷氨酰胺+2-酮戊二酸+還原型輔酶