[發(fā)明專利]快速檢測牛γ干擾素的試劑條及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810242893.5
• 申請日: 2008-12-30
• 公開（公告）號: CN101452000A
• 公開（公告）日: 2009-06-10
• 發(fā)明（設計）人: 秦愛建;邵紅霞;金文杰;趙士學;尹天燕
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/52
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領域：

本發(fā)明屬于生物技術(shù)檢測領域，具體涉及一種檢測牛γ干擾素的試劑條及其制備方法。

背景技術(shù)：

1.膠體金快速診斷技術(shù)的原理

膠體金(Colloidal?gold)，是由金離子還原而成的許多單個金顆粒組成的懸乳液，膠體金顆粒是有一個基礎的晶核(原子金周圍包含有11個金原子的二十面體)及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，緊連在金核表面的是內(nèi)層負離子(AuCl₂^—)，外層離子層H⁺則分散在膠體間溶液(見圖1)。金顆粒表面所包圍的陰性電荷層，叫做zata電位，可以使膠體金顆粒之間相互排斥而使懸浮液保持穩(wěn)定。

膠體金顆粒可以從5～150nm不等，制備膠體金仍基于還原法，常用的有鞣酸、檸檬酸三鈉、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等各種有機或無機化合物。還原劑的濃度和還原力越高，那么所合成的膠體金顆粒就越小。膠體金2～5nm是桔黃色，10～20nm是酒紅色，大顆粒30～64nm是深紅色。小分子的膠體金顆粒基本上是圓球形，30～80nm為偏心圓形。

膠體金標記，實質(zhì)上就是蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)被吸附到膠體金顆粒表面的過程。蛋白質(zhì)與金顆粒的結(jié)合機制大概有以下幾個方面：帶負電荷的金顆粒與蛋白質(zhì)上的帶正電的氨基反應；其次，蛋白質(zhì)通過疏水作用吸附于金顆粒表面；配位鍵是通過蛋白質(zhì)中半胱氨酸的硫殘基與金顆粒的電子層發(fā)生配位結(jié)合。在標記后需要加入一定量的穩(wěn)定劑，常用的穩(wěn)定劑有牛血清白蛋白(BSA)、聚乙二醇(PEG)、明膠和干酪素等封閉金顆粒未被占據(jù)的位點以減少非特異性反應并穩(wěn)定懸膠溶液。

膠體金免疫快速診斷技術(shù)是在酶聯(lián)免疫吸附試驗、乳膠凝集試驗、單克隆抗體技術(shù)、層析分析技術(shù)、膠體金標記技術(shù)和新材料技術(shù)基礎上完善起來的一項固相標記新型免疫檢測技術(shù)。膠體金快速診斷技術(shù)是以膠體金作為示蹤物或顯色劑，將膠體金標記在抗體上，再利用抗原抗體的血清學反應原理，把金顆粒連接到抗原上，當抗原抗體反應處達到一定密度時(即金顆粒10⁷個/mm²)，出現(xiàn)肉眼可見的紅色斑點。膠體金標記抗體實質(zhì)是抗體被吸附到膠體金顆粒表面的過程，且這種吸附屬于物理吸附，對抗體的生物活性影響很小，易獲得較高的標記率；另外膠體金不屬于生物活性物質(zhì)，干擾檢測結(jié)果的因素大大減少。目前在檢驗中的應用主要是有2種形式：穿流形式，又稱為膠體金免疫滲濾試驗(Dot-immunogold?filtration?assay?DIGFA)；另一種為側(cè)向橫流形式，又稱為膠體金免疫層析試驗(Gold?immunochromatography?assay，GICA)。膠體金免疫滲濾試驗始于1985年，最初以酶作為標記物。1989年Splelberg以膠體金為標記物成功檢測了艾滋病病毒(HIV)抗體，確立了免疫滲濾試驗的基本技術(shù)，即主要以層析微孔膜(硝酸纖維素膜，稱NC膜)為固相載體，在NC膜上固定已知的抗原或抗體，封閉包被后，將其裝入免疫滲濾裝置(塑料小盒)中，加待測樣品，洗滌后用膠體金探針檢測相應的抗原或抗體。塑料小盒一般為扁平形，里面裝滿吸水材料，盒分為底和蓋兩部分，蓋的中央有一直徑0.4～0.8cm孔，小孔下緊貼吸水墊料放置硝酸纖維素膜。

膠體金免疫層析技術(shù)原理與免疫滲濾技術(shù)基本一致，只是將原來的滲濾改為層析。它同樣以硝酸纖維素膜為固相載體，通過毛細管作用使樣品溶液在層析條上移動，并同時使樣品中的待測物質(zhì)與層析材料上待測物的受體發(fā)生高特異高親和性的免疫反應。層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶)，通過直接可目測的標記物膠體金而得到直觀的實驗現(xiàn)象(如顯色)，而游離標記物則越過檢測帶，達到與結(jié)合標記物自動分離的目的。

2.牛結(jié)核病的診斷