[發明專利]生產人組織纖溶酶原激活劑的方法

無效

• 申請號: 200810242890.1
• 申請日: 2008-12-30
• 公開（公告）號: CN101492662A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 成勇
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/85;C12N5/20;A01K67/027
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 盧亞麗

1、一種生產人組織纖溶酶原激活劑和人乳鐵蛋白的方法，其特征在于，用含有核心啟動子的調控序列和cDNA及BLG信號肽組成的表達載體制備轉基因小鼠，取轉基因小鼠淋巴細胞或乳腺上皮細胞，與腫瘤細胞融合，獲得轉基因雜交瘤細胞，催乳素誘導轉tPA基因雜交瘤細胞，并篩選獲得高表達細胞株，將表達細胞再轉染，再篩選獲得高表達雜交瘤細胞株；高表達細胞接種泌乳期BALB/C小鼠腹腔，收集腹水，獲得重組人組織纖溶酶原激活劑。

2、根據權利要求1所說的方法，其特征在于，具體步驟：

(1)采用分子克隆的方法構建含BLG信號肽、人tPA?K2與P區序列及相關的啟動子組成的基因表達載體pBCrt-PA；

(2)用pBCrt-PA哺乳動物細胞表達載體制備tPA轉基因小鼠；

(3)從tPA轉基因小鼠中分離淋巴細胞；

(4)淋巴細胞與小鼠SP2/0骨髓瘤細胞按20∶1混合，加入PEG6540，在HAT培養基篩選培養，獲得轉tPA基因小鼠雜交瘤細胞；

(5)轉tPA基因雜交瘤細胞誘導表達，篩選出高表達細胞株；

(6)高表達細胞株接種泌乳期BALB/C小鼠，產生腹水，收集腹水得到重組人組織纖溶酶原激活劑。