[發明專利]雞禽流感疾病抗病育種的方法及專用試劑盒

無效

• 申請號: 200810240802.4
• 申請日: 2008-12-23
• 公開（公告）號: CN101440409A
• 公開（公告）日: 2009-05-27
• 發明（設計）人: 杜立新;李宏濱;尹春光
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及雞禽流感疾病抗病育種的方法及專用試劑盒。

背景技術

隨著現代養禽業集約化程度的不斷提高，家禽的飼養密度越來越大，家禽傳染病對家禽業的影響巨大，一旦暴發，給養禽業帶來了巨大的經濟損失，影響家禽產品的產量和市場的穩定。此外，人類的現代生活與禽類的關系越來越密切，人類感染動物源性疾病的幾率也會有所上升，禽流感病毒的肆虐不但給許多國家的家禽養殖業帶來了沉重打擊同時也向全人類的健康提出了新的嚴峻挑戰，其中由于H5N1亞型病毒大流行，已經造成了大批禽類死亡和重大的經濟損失，并且已經對全球人類健康構成潛在的重大威脅。

組織培養細胞或動物機體細胞在病毒或其它干擾素誘生劑的作用下，可產生一種低分子量的可溶性糖蛋白，即干擾素(Interferon，IF，IFN)。當干擾素進入其它未感染的細胞時，可以誘導細胞產生蛋白質，抑制其它病毒復制。Mx蛋白就是在IFN誘導下產生的蛋白質，是繼2′，5′寡腺苷酸合成酶和P86蛋白激酶后發現的又一種抗病毒蛋白。

禽類的Mx蛋白基因具有抵抗禽流感病毒及水皰性口炎病毒(VSV)的功能，禽類是禽流感的自然宿主，因此對禽類Mx蛋白基因進行研究具有重要意義。GED區是Mx蛋白執行抗病毒的功能區域。

發明內容

本發明的目的是提供一種雞禽流感疾病抗病育種的方法及專用試劑盒。

本發明所述雞禽流感疾病抗病育種的方法，是檢測待測雞的序列表中序列1所示核苷酸序列的自5′末端第2216位脫氧核糖核苷酸是G還是A，確定待測雞的基因型是AA、BB還是AB，采用AA基因型的雞進行育種；所述AA基因型為序列表中序列1所示核苷酸序列的自5′末端第2216位脫氧核糖核苷酸為A的純合體；所述BB基因型為序列表中序列1所示核苷酸序列的自5′末端第2216位脫氧核糖核苷酸為G的純合體；所述AB基因型為它們的雜合體。

其中，所述檢測待測雞的序列表中序列1所示核苷酸序列的自5′末端第2216位脫氧核糖核苷酸是G還是A的方法如下：

以待測雞的基因組DNA為模板，用如下兩對引物中的任一對進行PCR擴增：

1)pCF和pAR；

2)pCF和pBR；

以所述pCF和pAR為引物的PCR擴增產物用Tsp509I酶切、以pCF和pAR為引物的PCR擴增產物用CviQI酶切，然后電泳檢測酶切產物的片段的大小；所述pCF的核苷酸序列為序列表中的序列2；所述pCR的核苷酸序列為序列表中的序列3；所述pAR的核苷酸序列為序列表中的序列4。

所述方法中，用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測酶切產物，以pCF和pAR為引物，只有兩條帶，待測雞的基因型是AA；只有一條帶，待測雞的基因型是AB；只有三條帶，待測雞的基因型是BB；

以pCF和pBR為引物，只有兩條帶，待測雞的基因型是BB；只有一條帶，待測雞的基因型是AA；只有三條帶，待測雞的基因型是AB。

所述方法中，用3％的瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切產物，以pCF和pAR為引物，只有50-100bp的一條帶，待測雞的基因型是AA；只有101bp的一條帶，待測雞的基因型是BB；有兩條帶，待測雞的基因型是AB；

以pCF和pBR為引物，只有50-100bp的一條帶，待測雞的基因型是BB；只有101bp的一條帶，待測雞的基因型是AA；有兩條帶，待測雞的基因型是AB。

本發明的另一個目的是提供一種輔助檢測雞禽流感抗性的試劑盒。

本發明所提供的輔助檢測雞禽流感抗性的試劑盒，包括引物pCF、引物pAR和限制性內切酶Tsp509I，所述引物pCF的核苷酸序列為序列表中的序列2，所述引物pAR的核苷酸序列為序列表中的序列3。

本發明還提供了另一種輔助檢測雞禽流感抗性的試劑盒，包括引物pCF、引物pBR和限制性內切酶CviQI，所述引物pCF的核苷酸序列為序列表中的序列2，所述引物pBR的核苷酸序列為序列表中的序列4。

其中，所述試劑盒還包括進行PCR的試劑和進行電泳的試劑。

本發明的雞禽流感疾病抗病育種的方法可以篩選出候選的具有較強抗禽流感能力的品系，對培育抗禽流感病毒的禽類具有重大的經濟意義和現實意義。

附圖說明

圖1為雞Mx蛋白基因GED區部分序列。

圖2為堿基錯配設計的區域。

圖3為利用錯配引物引入酶CviQI或Tsp509I的酶切位點。

圖4為酶切產物進行3％的瓊脂糖凝膠電泳。