[發明專利]一種蛹蟲草菌種分離保藏方法

有效

• 申請號: 200810240119.0
• 申請日: 2008-12-18
• 公開（公告）號: CN101748073A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 邢禮軍;馬榮才;劉寶平
• 申請（專利權）人: 北京農業生物技術研究中心;北京東昇農業技術開發有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12M1/24;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明屬于蛹蟲草栽培技術領域，涉及蛹蟲草菌種及遺傳特性 保持的方法。

背景技術

蛹蟲草(Cordyceps?militaris(L.Fr)Link)，又名蠶蟲草、北冬蟲 夏草，屬子囊菌門(Ascomycota)、核菌綱(Pyrenomycetes)、球殼 目(Sphaeriales)、麥角菌科(Clavicipitaceae)、蟲草屬(Cordyceps (Fr.)Link)真菌。蛹蟲草是蟲草屬真菌的模式種，在自然界多寄 生在多寄生在多種鱗翅日昆蟲的幼蟲和蛹上。

近年來，很多研究都表明，人工栽培的蛹蟲草化學成分及藥理 作用與冬蟲夏草相似，但價格卻遠遠低于冬蟲夏草，因此，蛹蟲草 的開發應用具有極大的潛在市場。人工培養蛹蟲草是解決野生蟲草 來源不足的良好途徑，相關的研究很多，然而人工培養過程中菌種 退化現象嚴重是制約產業化開發的一大瓶頸。影響人工培養蛹蟲草 菌種退化的因素很多，簡單的可以分成兩的大類，一類是菌株的遺 傳特性造成菌種的退化(內因)。一類是培養條件、操作環節、環境 因素導致的菌種退化(外因)。

人工培養蛹蟲草要得到子實體，先決條件是這個蛹蟲草菌株要 有形成子實體的能力，不同菌株所具備的遺傳背景是不一樣的，所 以它們具備形成的子實體的能力有差異。然而，在實際生產中，即 使是優勢蛹蟲草菌株，隨著菌種傳代、轉接次數的增加或保藏時間 的延長，菌種資源極易退化。

蛹蟲草菌種退化的形態表現為：角變現象增加；菌絲長勢變弱， 子實體原基的產生減少，培養周期越來越長，菌絲易老化；菌絲體 色素變弱，甚至沒有色素的產生，子實體產量顯著減少且品質改變 等。在生產上通常蛹蟲草菌種轉管次數不宜超過3次(俞孕珍， 1995)。

蛹蟲草菌種退化后表現在子實體上為產量和品質下降，畸形率 上升，甚至不分化子實體原基(王升厚，1998)。

在實際的蛹蟲草規?；a的菌種分離和篩選過程中，最常采 用的是組織分離法。組織分離法就是指通過子實體組織分離獲得純 菌絲的方法。食用菌的子實體實際上就是菌絲體的紐結物，它具有 很強的再生能力。因此，只要切取一小塊子實體組織，把它移植到 培養基上，就能獲取純粹的菌絲體。

組織分離培養，從生物學的角度來看，乃是一種無性繁殖，是 從組織—菌絲—組織—菌絲周而復始的循環過程，遺傳變異小，但 在無性繁殖過程中可能產生自然變異和突變，但組織分離產生的變 異不很大，是一種累積、漸進的過程，變異是絕對的，穩定是相對 的。組織分離法還會因取樣時子實體發育的不同時期和部位，以及 個人的經驗和技巧而產生不同的結果。

組織分離法取樣位置不同遺傳特性產生區別的一個典型事例 是：香菇同一菌種子實體菇肉、菇柄組織分離物與菌絲體間既保持 了遺傳物質相對穩定性和遺傳性狀的穩定性(DNA相似性在88％以 上)，存在著相對的遺傳變異，雖然變異極為細微，但是預示著一 種潛在必然趨勢，反映了累積、漸進的漫長過程，這是由于內、外 因造成的，但主要是由于遺傳型的變異造成的，育種工作者不應忽 略這種變異的存在，因為這很可能是造成某些菌種退化和變異的原 因所在。(香菇子實體組織分離物與菌絲體的遺傳相關性上海農 業學報1997，13(4)：85～88)

孢子分離法是利用食用菌成熟的有性孢子即擔孢子、子囊孢 子，無性孢子即厚垣孢子、節孢子、粉孢子等萌發成菌絲，來獲得 純菌種的一種方法。由于孢子的數量大，變異的機會多，因此采用 孢子分離法，可以有更多選擇優良菌株的機會，而且孢子的生活力 強，所得菌種菌齡小，生活力旺盛。但是有些食用菌的擔孢子不易 萌發成菌絲，還有些食用菌的孢子有兩種或四種極性，單孢分離的 菌株有時不產生子實體，必須經過交配，得到結實性的雙核菌絲， 才能用于產生。故孢子分離法又有單孢分離法和多孢分離法兩種。

單孢分離法是指每次只取一個擔孢子，讓它萌發成菌絲體來獲 得純菌種的一種方法。多孢分離法就是把許多孢子接種在同一培養 基上，讓它們萌發，自由交配來獲得食用菌純菌種一種方法。