[發(fā)明專利]迷迭香酸在大腸桿菌L-天冬酰胺酶激活劑中的應(yīng)用無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810237783.X | 申請日： | 2008-12-03 |
| 公開（公告）號： | CN101423827A | 公開（公告）日： | 2009-05-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 邵楠;李榮貴 | 申請（專利權(quán)）人： | 邵楠;青島大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/82 | 分類號： | C12N9/82;C12R1/19 |
| 代理公司： | 青島高曉專利事務(wù)所 | 代理人： | 隋臻瑋 |
| 地址： | 266071山東省青島市市*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 迷迭香酸 大腸桿菌 天冬 酰胺酶 激活劑 中的 應(yīng)用 | ||
1.迷迭香酸作為大腸桿菌L-天冬酰胺酶激活劑的應(yīng)用，其特征在于首先從大腸桿菌制備L-天冬酰胺酶提取液；在L-天冬酰胺酶活性測定體系中分別加入TE緩沖液以及不同濃度的迷迭香酸和L-天冬酰胺，45℃水浴加熱，用20％三氯乙酸終止反應(yīng)；反應(yīng)體系離心后加AB-8大孔樹脂懸浮液，充分振蕩后離心以去除溶液中的迷迭香酸，分別取上清于蒸餾水中，加Nessler試劑，振蕩使之充分混勻后于395nm處測定吸光度，測定酶促反應(yīng)速度；計算每個迷迭香酸濃度下的米氏常數(shù)，迷迭香酸濃度為0.375×10-4～3.0×10-4g/ml時可顯著提高體系中L-天冬酰胺酶活性，降低大腸桿菌L-天冬酰胺酶催化L-天冬酰胺分解反應(yīng)的米氏常數(shù)值，提高反應(yīng)速度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的迷迭香酸作為大腸桿菌L-天冬酰胺酶激活劑的應(yīng)用，其特征在于L-天冬酰胺酶的來源是大腸桿菌：將活化好的大腸桿菌接種入LB培養(yǎng)液中37℃過夜培養(yǎng)；將培養(yǎng)物在4℃條件下離心，收集菌體細胞；TE緩沖液洗滌沉淀，離心去上清；TE緩沖液懸浮細胞，超聲破碎；在4℃條件下離心，得上清液L-天冬酰胺酶提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的迷迭香酸作為大腸桿菌L-天冬酰胺酶激活劑的應(yīng)用，其特征在于TE緩沖液是50mmol/LTris·Cl，1mmol/L?EDTA，pH7.4。
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