[發明專利]從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法

無效

• 申請號: 200810237196.0
• 申請日: 2008-12-22
• 公開（公告）號: CN101445819A
• 公開（公告）日: 2009-06-03
• 發明（設計）人: 魏順安;周小華;金挺;廖妙飛;蘇霞利;陳林;趙成霞
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04;C12P19/00;C12P21/06;C08B37/00;C07K1/34
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1.一種從鹽藻渣中制備水解低聚糖和短肽的方法，其特征在于具體的方法步驟如下：

(1)對鹽藻渣進行分離

以提取β—胡蘿卜素的鹽藻渣粉為原料，按鹽藻渣粉的重量：去離子水的體積比為1:5～10的比例，先在容器中加入去離子水，再放入鹽藻渣粉，攪拌至鹽藻渣粉分散均勻后，接著用超聲波處理30～60分鐘，然后用10000～13000轉/分的速度，離心5～20分鐘，分別收集下層沉淀和上層清液，收集的上層清液用截留分子量為5KDa的超濾器進行超濾分離，再分別收集超濾濾過液和截留濃縮液；

(2)制備皮肽能量激活液

第(1)步完成后，將第(1)步收集的超濾濾過液置于真空濃縮器中，先用氫氧化鉀溶液調節其pH值為5.5～6.0，后在溫度為80～90℃、真空度為0.06～0.08Mpa的條件下，進行真空濃縮至可溶性固形物濃度為10～12％，就制備出K離子濃度為40～60mg/mL、氨基酸濃度為18～25mg/mL及磷酸鹽濃度為13～16mg/mL的皮膚能量激活液；

(3)對截留濃縮液進行分離

第(2)步完成以后，對第(1)步收集的截留濃縮液，按截留濃縮液：蒸餾水的體積比為1:5～10的比例，先在截留濃縮液中加入蒸餾水并攪拌均勻后，再轉移至提取罐中，用稀氫氧化鈉溶液調節其pH值為9～10，加熱升溫至80～90℃，在攪拌下保溫提取5～10小時，提取完成后，用換熱器降溫至40～50℃，再泵入管式離心機，以10000～14000轉/分的速度，進行離心分離，分別收集下層沉淀和上層清液，將收集的下層沉淀稱重，然后加入其5～10倍重量的、pH值為9～10的蒸餾水，進行洗滌，再以10000～14000轉/分的速度進行離心分離，再分別收集下層沉淀和上層清液，如此重復洗滌和分離1～2次，最后，分別將各次收集的下層沉淀和上層清液合并；

(4)制備水解鹽藻低聚糖和多糖凍干粉

①制備水解鹽藻多糖溶液

第(3)步完成以后，對第(3)步最后合并的各次上層清液，先用稀鹽酸溶液調節其pH值為5～6，再加入脫除β—胡蘿卜素鹽藻質量百分數為2～4％的葡萄聚糖酶和1～3％的纖維素酶，在溫度為50～60℃條件下，攪拌酶水解3～6小時；

②超濾分離

第(4)-①步完成以后，對第(4)-①步制備出的水解鹽藻多糖溶液，用截留分子量為3KDa的超濾器，在壓力為0.1～0.25Mpa下，進行超濾分離，分別收集超濾濾過液和超濾截留液；

③制備水解鹽藻低聚糖凍干粉

第(4)-②步完成后，先將(4)-②步收集的分子量小于3KDa水解鹽藻低聚糖過濾液，置于抽濾機中，用截留分了量為300Da的納濾膜，進行濃縮，濃縮至截留液中可溶性固形物的質量濃度為10～15％為止，就制備出水解鹽藻低聚糖濃縮液，然后，將水解鹽藻低聚糖濃縮液置于冷凍干燥機中，在真空度為20～60Pa、溫度為—50～—60℃下，進行真空干燥36～40小時，就制備出分子量小于3KDa的水解鹽藻低聚糖凍干粉；

④制備水解鹽藻多糖凍干粉

第(4)-②步完成后，先將第(4)-②步收集的分子量大于3KDa水解鹽藻多糖截留液置于低溫冰箱中，預凍1～3小時，然后在真空度為20～60Pa、溫度為—50～—60℃條件下，進行冷凍干燥24～30小時，就制備出平均分子量為12KDa的水解鹽藻多糖凍干粉；

(5)制備水解鹽藻短肽凍干粉

①制備水解鹽藻蛋白液

第(4)步完成后，將第(3)步最后合并的下層沉淀，置于水解釜中，先按沉淀質量：純凈水體積比為1:5～8的比例，向水解釜中加入純凈水，再攪拌至沉淀均勻分散于純凈水中，接著用稀氫氧化鈉溶液調節其pH值為8～9，再加熱升溫至50～60℃后，加入沉淀質量百分數為2％～5％的堿性蛋白酶或胰蛋白酶，保溫攪拌酶水解40～60分鐘后，再次加入沉淀質量百分數1～2％的肽酶，即風味蛋白酶或木瓜蛋白酶，在攪拌下繼續酶水解1.5～3.5小時，最后加熱升溫至80～90℃，并恒溫保持15～20分鐘；

②離心分離

第(5)—①步完成后，將第(5)—①步制備出的水解鹽藻蛋白液泵入管式離心機中，以12000～14000轉/分的速度，進行離心分離10～20分鐘，分別收集沉淀和上層清液，將收集的清液稱重并置于脫色裝置中，升溫至80～90℃后，加入其重量3～5％的木質活性炭，攪拌脫色10～20分鐘，脫色完成后，棄活性炭，收集脫色液，將收集的脫色液放入真空過濾器中進行真空抽濾，收集過濾液，然后將收集的過濾液泵入截留分子量為800Da的納濾器中，在壓力為0.1～0.3Mpa下，進行納濾濃縮，直至納濾截留液中的可溶性固形物的質量濃度為10～15％為止，就制備出平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液；收集納濾濾過液，并在壓力為0.3～0.6Mpa下，進行反滲透濃縮，直至反滲透濃縮液中的可溶性固形物的質量濃度為10～15％為止，就制備出平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液；

③制備水解鹽藻短肽凍干粉

第(5)—②步完成以后，將第(5)—②步制備出的平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽濃縮液置于低溫冰箱中，預凍1～3小時，然后置于冷凍干燥機中，在壓力為25～50Pa、溫度為—50～—60℃條件下，進行冷凍干燥24～30小時，就制備出總氮含量為12.5～15％、平均分子量為600Da的水解鹽藻短肽凍干粉；

④制備水解鹽藻肽凍干粉

第(5)—③步完成后，將(5)—②步制備出的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽截留濃縮液置于低溫冰箱中，預凍1～3小時，再置于冷凍干燥機中，在壓力為25～50Pa、溫度為—50～—60℃下，進行冷凍干燥20～24小時，就制備出總氮量為12.0～14.5％的平均分子量為5KDa的水解鹽藻肽凍干粉。