[發(fā)明專利]用NaCI溶液從凝膠中回收DNA或RNA的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810236897.2
• 申請日: 2008-12-19
• 公開（公告）號: CN101747396A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳會平;牛惠惠;劉棟
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C07H1/06;C12N15/10
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專利中心 42201
• 代理人: 夏惠忠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及回收DNA、RNA的方法。

背景技術(shù)

從瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中回收DNA或RNA是一種常用技術(shù)，目的是分離和純化DNA或RNA片段。目前最常用的是用離心柱分離純化試劑盒進(jìn)行操作，然而此類試劑盒比較昂貴，一般實(shí)驗(yàn)室無力購買，導(dǎo)致不能廣泛應(yīng)用。因此急需一種價格低廉，能夠廣泛應(yīng)用的從瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中回收DNA或RNA方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的任務(wù)是提供一種用NaCI溶液從凝膠中回收DNA或RNA的方法，實(shí)現(xiàn)以價格便宜和容易得到的NaCI溶液回收凝膠中DNA或RNA片段，以克服現(xiàn)有技術(shù)使用離心柱分離純化試劑盒進(jìn)行操作而導(dǎo)致價格昂貴，不能廣泛應(yīng)用的不足。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是：

1.用3-4倍體積的0.4M?NaCI，4℃，洗脫瓊脂糖凝膠中的DNA或聚丙烯酰胺凝膠中的RNA；

2.加入3-4倍無水乙醇，混勻，置冰上至少2小時或于-20℃過夜，以沉淀DNA或RNA。

本發(fā)明提供的這種用NaCI溶液從凝膠中回收DNA或RNA的方法，包括以下步驟：

1.取一干凈1.5ml?EP離心管，稱取其重量；

2.切取含DNA或RNA條帶的凝膠，放入1.5ml?EP離心管中；

3.再次稱取離心管重量，并計算凝膠重量；

4.盡量倒碎凝膠，以便加入NaCI溶液后DNA或RNA快速從凝膠中析出；

5.加入3-4倍體積(V/W)的0.4M?NaCI溶液；

6.震蕩混勻1分鐘，然后置于4℃過夜，對DNA或RNA進(jìn)行洗脫，其間混搖2-3次以促進(jìn)DNA或RNA析出；

7.吸取上清，加入3-4倍無水乙醇，混勻；

8.置冰上至少2小時或于-20℃過夜，以促進(jìn)DNA或RNA沉淀；

9.4℃14,000rpm離心15分鐘，以沉淀DNA或RNA；

10.吸取上清，空氣干燥后加適量TE或水溶解，4℃或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以本發(fā)明方法回收RNA時，要使用無RNA酶的試劑和器具。

本發(fā)明方法所得DNA的回收率一般在60-80％之間；RNA的回收率一般在90-100％之間。本發(fā)明方法實(shí)現(xiàn)了以價格便宜和容易得到的NaCI溶液回收凝膠中DNA或RNA片段，克服了現(xiàn)有技術(shù)使用離心柱分離純化試劑盒進(jìn)行操作而導(dǎo)致價格昂貴，不能廣泛應(yīng)用的不足。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1.取一干凈1.5ml?EP離心管，稱取其重量；

2.切取含DNA或RNA條帶的凝膠，放入1.5ml?EP離心管中；

3.再次稱取離心管重量，并計算凝膠重量；

4.盡量倒碎凝膠，以便加入NaCI溶液后DNA或RNA快速從凝膠中析出；

5.加入3-4倍體積(V/W)的0.4M?NaCI溶液；

6.震蕩混勻1分鐘，然后置于4℃過夜，對DNA或RNA進(jìn)行洗脫，其間混搖2-3次以促進(jìn)DNA或RNA析出；

7.吸取上清，加入3-4倍無水乙醇，混勻；

8.置冰上至少2小時或于-20℃過夜，以促進(jìn)DNA或RNA沉淀；

9.4℃14,000rpm離心15分鐘，以沉淀DNA或RNA；

10.吸取上清，空氣干燥后加適量TE或水溶解，4℃或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>