[發明專利]黃顙魚性染色體特異分子標記及遺傳性別鑒定方法

有效

• 申請號: 200810236650.0
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101418347A
• 公開（公告）日: 2009-04-29
• 發明（設計）人: 桂建芳;王達;毛慧玲;陳宏溪;劉漢勤
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于水產生物技術領域中的魚類遺傳性別鑒定和性別控制技術，更具體涉及一種黃顙魚性染色體特異分子標記及遺傳性別鑒定方法。本發明在黃顙魚的性別控制和全雄苗種的培育中具有重要的應用價值，同時在其它魚類性別控制和單性苗種生產中也具有應用前景。

背景技術

黃顙魚[Pelteobagrus?fulvidraco(Richardson)]是具有較高經濟價值的底棲鯰形目鲿科魚類，廣泛分布于江河、湖泊、水庫等水域。其肉質鮮美，營養豐富，肌間刺少，因而深受消費者青睞。近年來價格較高，市場需求量日益增大。黃顙魚雄魚比雌魚生長快。據調查，在相同養殖條件下，第一年雄性黃顙魚比同胞雌魚的生長速度快30％左右。在養殖的第二年，其雄魚生長至150-200克，而雌魚卻只有50-75克，雌雄生長差異接近3倍。因此，如果能夠在育種中人工控制黃顙魚的性別，培育出全雄黃顙魚，將大大提高產量，降低養魚成本，提高經濟效益。

生產單性雄魚有幾種方法可供選擇：如人工挑選、雄性激素直接誘導性逆轉、雄核發育、種間雜交、人工誘導三倍體以及遺傳學方法等。目前，使用遺傳學的方法生產XY全雄魚在尼羅羅非魚單性養殖使用過。這種稱為GMT技術，適用于雄性配子異型的魚類，方法可靠、穩定，而且對環境友好，無不良的影響。

最近劉漢勤等成功地從XY生理雌魚雌核發育產生了YY超雄魚，并且通過與XX雌魚測交得到了全雄子代，驗證了YY超雄魚的存在，說明了該技術路線的可行性，也為全雄黃顙魚的生產打下了堅實的基礎。但當應用到大規模生產中時，該技術存在一些技術瓶頸，阻礙了全雄魚的生產，比如：生產實踐中發現，通過黃顙魚XY雌魚雌核發育產生YY超雄魚的同時，也產生了XY正常雄魚，其數量與YY超雄魚不相上下，阻礙了YY超雄魚在全雄魚苗培育中的應用。因此如何準確快捷地鑒定開YY和XY雄魚成為實現全雄黃顙魚苗規模化生產中的一個關鍵點。傳統的方法只有通過測交實驗后，根據子代性別比例，才能判斷出其父本為遺傳YY或XY雄魚；而在測交實驗中，測交子代需要養殖3個月以上才能解剖根據組織學判斷其性別，因此實驗周期長，養殖成本高，不利于大規模生產；不僅如此，多年來的繁殖實驗，還未發現YY超雄魚具有和正常XY雄魚一樣的自然繁殖能力；而且黃顙魚精巢為小葉型，在行人工繁殖時幾乎是無法擠出精液的，因此測交實驗時，通常要殺掉雄魚從精巢獲得精液進行人工授精。因此無法通過測交實驗直接獲得活的YY超雄魚用于持續生產全雄魚苗。

綜上所述，要實現全雄黃顙魚苗的規?；a，急需一種經濟、快捷、準確且不須殺害黃顙魚的YY超雄魚鑒定方法。

隨著DNA分子標記技術的發展和成熟，利用DNA標記鑒定性別成為可能，為我們提供一種經濟簡捷并且準確的遺傳性別鑒定手段，但前提是要先篩選到性別特異DNA標記。目前，在一些經濟魚類中，通過各種DNA分子標記技術(RAPDs，RFLPs，SSRs，AFLPs等)篩選性別特異標記已有許多報道，如：Kovacs等利用RAPD掃描非洲鯰魚(Clarias?gariepinus)雌、雄基因池，找到兩個雄性性別相關的RAPD標記；Sakamoto等發現兩個SSR標記(OmyFGT19?TUF和OmyRGT28?TUF)與雄性虹鱒(Oncorhynchusmykiss)的性別決定位點相連鎖。同時，魚類的性別特異DNA標記通常具有物種或者品系特異性，一種魚類的性別特異標記通常不能跨物種使用，因此要利用分子標記實現黃顙魚的遺傳性別鑒定，首先要篩選到黃顙魚的性別特異標記。

AFLP分子標記技術是一種基于PCR技術的多位點分子標記技術，具有顯示出很強多態性的能力。每對AFLP選擇性擴增引物能夠獲得50-100個條帶，通過有限的引物組合可以獲得大量的擴增片段。因此AFLP分子標記特別適于對尚無分子遺傳信息背景的物種進行研究。近五年來AFLP分子標記技術在篩選性別標記研究中得到了較廣泛應用，并且有一些成功的報道，如Ezaz等用AFLP技術掃描尼羅羅非魚(Oreochromis?niloticus?L.)基因組，找到3個Y染色體連鎖(OniY425.OniY382.OniY227)和一個X染色體連鎖(OniX420)的AFLP標記；Brunelli等應用AFLP也找到了一個新的大鱗大麻哈魚Y染色體特異的標記。

發明內容