[發(fā)明專利]一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810236240.6
• 申請日: 2008-11-27
• 公開（公告）號: CN101406157A
• 公開（公告）日: 2009-04-15
• 發(fā)明（設計）人: 王福銀;巫建新;史云光;朱艷;蔣澤平;史青云;徐招弟;鮑榮靜;湯榮弟;張方亮
• 申請（專利權）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術學院綠苑實業(yè)總公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 黃嘉棟

技術領域

本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)法，具體地說，是花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)法。

背景技術

花葉夾竹桃(Nerium?indicum?cv.Variegata)是夾竹桃科夾竹桃屬常綠直立大灌木。原產(chǎn)于伊朗、印度、尼泊爾，我國長江以南各省區(qū)廣為栽植的常用彩葉樹種。整個植株，黃綠相間，有的葉片全黃，有的葉片黃、綠交錯。植株高達4-5米，萌蘗性強，極耐修剪。葉革質(zhì)，較原種葉片略薄，花冠粉紅色，徑約5厘米，有特殊香氣，單瓣或重瓣，果長圓形，花期6-10月，常植于公園、庭院、街頭、綠地等供觀賞。為了保持植株原有性狀，必需采用無性繁殖方法繁殖，傳統(tǒng)的繁殖方法是扦插、壓條，但繁殖速度慢。由于種質(zhì)資源少，傳統(tǒng)方法很難在短期內(nèi)獲得大量植株。在現(xiàn)有技術中，沒有有關花葉夾竹桃組織培養(yǎng)方法的報道。

發(fā)明內(nèi)容

一種花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，它基本上由下列步驟組成：

步驟1：采用經(jīng)選育的花葉夾竹桃優(yōu)良單株腋芽莖段或莖尖為外植體，經(jīng)70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(一般8-10分鐘)，用無菌水沖洗3-5次；

步驟2：在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動培養(yǎng)基的玻璃瓶中，將其置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日照光14小時，溫度22-27℃、濕度為50％-65％，培養(yǎng)40天，分化長成試管芽苗，所述的啟動培養(yǎng)基為：每升基本培養(yǎng)基加：噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-芐基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；

步驟3：將從步驟2中長成的芽苗，剪切，按步驟2轉(zhuǎn)接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)規(guī)模需要達2000-5000瓶時進入下一步，所述的增殖培養(yǎng)基為：每升基本培養(yǎng)基加：玉米素(ZT)0.5-1.5毫克、6-芐基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；

步驟4：將步驟3中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行壯苗培養(yǎng)，30天后進入下一步，所述的壯苗培養(yǎng)基為：每升基本培養(yǎng)基加：玉米素(ZT)0.2-1.0毫克、6-芐基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；

步驟5：將步驟4中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留4-5片葉片，按步驟2接種于經(jīng)消毒的含有生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進行生根培養(yǎng)7-12天，所述的生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)基為：每升基本培養(yǎng)基加：α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；

步驟6：將步驟5中生長的帶有根原基的無根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭:黃心土＝1:1(體積比)的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28℃，相對濕度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐漸見光，25天后生根成活，生根率達86％以上，40-50天，全光照。

上述的花葉夾竹桃的組織培養(yǎng)方法，所述的基本培養(yǎng)基的配方見表1：

表1：每升基本培養(yǎng)基中含有如下物質(zhì)種類和質(zhì)量：