[發(fā)明專利]氨基酸診斷/測定試劑(盒)及氨基酸濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810235992.0
• 申請日: 2008-12-10
• 公開（公告）號: CN101762501A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/17;G01N33/48;C12Q1/26
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種氨基酸診斷/測定試劑(盒)，同時本發(fā)明還涉及測定氨基酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

氨基酸含量的測定在醫(yī)學(xué)/食品/工業(yè)/農(nóng)業(yè)/環(huán)境中都是比較重要的測定項目。現(xiàn)有的測定方法有色譜法、電化學(xué)法、儀器分析法(氨基酸分析儀)、分光光度計等方法，這些方法或是操作方法較為繁雜、特異性差、或儀器設(shè)備成本較高等缺點。

氨基酸不是單純的一種物質(zhì)，用氨基酸分析儀可直接測定出17種氨基酸(儀器價格昂貴，不能普遍使用)，對于醫(yī)學(xué)/食品/工業(yè)/農(nóng)業(yè)/環(huán)境中來說，多數(shù)情況下，都是很多種氨基酸同時存在，所以需要測定總的氨基酸含量，它們不能以氨基酸百分率來表示，只能以氨基酸中所含的氮(氨基酸氮)的百分率表示。

大量食肉或饑餓時尿中氨基酸氮增加，孕婦及新生兒尿液氨基酸氮也增加。氨基酸代謝異常，造成某些氨基酸在體內(nèi)積累過多，使尿中氨基酸氮增高；急性肝萎縮、肝功能衰竭、Reye綜合征、或某些因素造成蛋白質(zhì)分解加速的疾病，遺傳性疾病所導(dǎo)致的代謝異常均可使尿中氨基酸氮增加。

酶法測定血、尿、體液、食品、土壤、工業(yè)產(chǎn)品中氨基酸氮含量具有特異性高、方法簡便、成本低的特點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定氨基酸濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的氨基酸診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行氨基酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明氨基酸濃度測定方法如下：

氨基酸+水+氧?氨基酸氧化酶?氧代酸+氨+過氧化氫

過氧化氫+二氧化碳+乙酰輔酶A?丙酮酸氧化酶?丙酮酸+

????????????????????????????????????????輔酶A+氧

丙酮酸+還原型輔酶?乳酸脫氫酶?乳酸+輔酶

這種方法應(yīng)用氨基酸氧化酶(amino-acid?oxidase；EC?1.4.3.2；EC?1.4.3.3)酶(偶)聯(lián)丙酮酸氧化酶(pyruvate?oxidase；EC?1.2.3.6)、乳酸脫氫酶(LactateDehydrogenase；EC?1.1.1.27；EC?1.1.1.28；EC?1.1.2.3)酶促反應(yīng)比色法。氨基酸氧化酶酶解氨基酸反應(yīng)產(chǎn)生過氧化氫，再通過(偶)聯(lián)合丙酮酸氧化酶、乳酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，通過測量340nm處吸光度下降的程度，可以測算氨基酸的濃度大小。

實驗表明，從測定結(jié)果的準確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明氨基酸診斷/測定試劑(盒)較為理想：

緩沖液????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????????500mmol/L

還原型輔酶????????????????0.25mmol/L

氨基酸氧化酶????????????????6000U/L

丙酮酸氧化酶????????????????8000U/L

乳酸脫氫酶??????????????????10000U/L

碳酸氫鈉????????????????????6mmol/L

乙酰輔酶A???????????????????12mmol/L

本發(fā)明的氨基酸診斷/測定試劑(盒)可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、氨基酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、乳酸脫氫酶、碳酸氫鈉(二氧化碳)、乙酰輔酶A。

試劑(盒)可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、碳酸氫鈉(二氧化碳)、乙酰輔酶A。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、氨基酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、乳酸脫氫酶。