[發(fā)明專利]一種以油橄欖為原料制備高純山楂酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810235935.2
• 申請(qǐng)日: 2008-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101418031A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳龍勝;呂楊;許舒雯;昕旸
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽省科學(xué)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C07J63/00
• 分類號(hào): C07J63/00;A61K36/63
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 何梅生

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物化學(xué)成分的提取方法，具體地說(shuō)是一種以油橄欖(包括果實(shí)、葉、橄欖油或榨油后殘?jiān)?為原料，制備高純山楂酸的方法。

二、背景技術(shù)

山楂酸(Maslinic?acid)屬于三萜酸類物質(zhì)，為齊墩果酸衍生物。有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

西班牙格拉納達(dá)大學(xué)的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)山楂酸能夠抑制絲氨酸蛋白酶(Can?J?PhysiolPharmacol.2007，85(9)：865)。而艾滋病病毒正是利用這種酶將自身從被感染的細(xì)胞中向外部釋放，擴(kuò)散至病毒感染者全身。湯旭蓁(中國(guó)天然藥物，2008，6(1)：53)提出山楂酸可顯著對(duì)抗腎上腺素、葡萄糖引起的血糖升高，對(duì)抗腎上腺素引起的肝糖原降解，增加葡萄糖致高血糖小鼠肝糖原含量；可增加正常小鼠肝糖原儲(chǔ)備，但不影響正常血糖；MárquezMartin?A(Free?Radic?Res.2006，40(3)：295)研究表明從油橄欖提取出的天然成分山楂酸在體外培養(yǎng)細(xì)胞中有明顯抗氧化性能，并在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞模型中表明山楂酸在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)水平上抑制動(dòng)脈誘導(dǎo)型一氧化氮核酶(iNOS)基因的表達(dá)。從而表明山楂酸是在阻止氧化應(yīng)激和促炎癥因子生成上有潛在的生物制藥發(fā)展前景。隨著枇杷葉藥用成分研究的深入，發(fā)現(xiàn)枇杷葉中三萜酸成份豐富，其中含有的科羅索酸具有降血糖、減肥、抗腫瘤和抗炎作用，山楂酸具有抗腫瘤、抗病毒和抗心血管疾病作用。國(guó)內(nèi)已有文獻(xiàn)報(bào)道山楂酸制備工藝，中國(guó)藥科大學(xué)研究了科羅索酸和山楂酸的合成工藝(CN?200410064929.7)。美國(guó)專利報(bào)道了以橄欖為原料制備含有齊墩果果酸、山楂酸和可生物吸收鹽混合物的方法(US6740778)，同時(shí)還報(bào)道了利用極性由弱到強(qiáng)的溶劑分步從油橄欖殘?jiān)刑崛≈苽渖介崤c齊墩果酸，產(chǎn)品中山楂酸含量大于85％，齊墩果酸含量大于85％(US?6037492)。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供可作為藥用原料的高純山楂酸，所要解決的技術(shù)問(wèn)題是以油橄欖為原料制備高純山楂酸。

本發(fā)明所稱的油橄欖原料包括其果實(shí)、葉、榨油后殘?jiān)烷蠙煊汀ＫQ的高純山楂酸是指山楂酸含量≥98wt％(重量百分比)的山楂酸。

本提取方法以油橄欖為原料，包括提取和純化，所述的提取是原料用水或/和有機(jī)溶劑回流提取，分離得到提取液，經(jīng)脫溶后得到提取物，提取物中山楂酸含量30wt％以下；所述的純化是提取物用固定相為正相硅膠或氧化鋁或反相C₈或C₁₈硅膠的柱色譜分離純化，當(dāng)用正相柱色譜分離純化時(shí)，以石油醚與乙酸乙酯或者氯仿與甲醇或者氯仿-丙酮按10：0—0：10體積比混合溶劑為洗脫液梯度洗脫，當(dāng)用反相柱色譜分離純化時(shí)，以pH值為2—7的乙醇—水或者甲醇—水為洗脫劑等度洗脫，其中水含量≤50vt％(體積百分比)，或者甲醇-1％醋酸水溶液(88：12；v:v)等度洗脫，收集洗脫液，脫溶后得到白色粉末狀高純山楂酸，山楂酸含量≥98wt％。

所述的有機(jī)溶劑選自甲醇或乙醇或乙酸乙脂或二氯甲烷或氯仿或丙酮或乙腈或甲苯或苯或異丁醇或正丁醇或乙醚中的一種或兩種以上混合溶劑。優(yōu)選70—90wt％乙醇溶液或甲醇溶液(即水溶液)。

當(dāng)使用橄欖油為原料時(shí)應(yīng)使用水、甲醇和乙醇中兩種以上混合溶液進(jìn)行萃取，分離得到萃取液，萃取液脫溶后得到提取物。

具體過(guò)程如下：

(1)將粉碎后的油橄欖原料(果實(shí)、葉或榨油后殘?jiān)?與溶劑質(zhì)量比為1:3至1:20，回流提取次數(shù)1至4次，每次0.5至5個(gè)小時(shí)；橄欖油用水、甲醇和乙醇中兩種以上混合液進(jìn)行萃取，料液體積比比為2:1至3:10，萃取時(shí)間為0.5至3個(gè)小時(shí)，萃取次數(shù)為1至3次；

(2)取濾出液或分層后萃取液回收溶劑干燥后即可得到山楂酸含量30wt％以下的提取物。

(3)將上述提取物進(jìn)行固定相為正相硅膠或氧化鋁或反相C₈或C₁₈硅膠柱色譜分離純化，正相柱色譜洗脫方式為石油醚與乙酸乙酯或者氯仿與甲醇或者氯仿丙酮混合體系梯度洗脫(10:0—0:10；v：v)，反相柱色譜洗脫方式為加酸調(diào)整后乙醇-水或者甲醇-水等度洗脫，洗脫劑中水含量≤50vt％，洗脫液pH值在2.0—7.0之間；或者甲醇-1％醋酸水溶液(88：12；v:v)等度洗脫。

(4)柱色譜分離純化后山楂酸餾分蒸干后得到白色粉末，即為含量大于98wt％高純度山楂酸。