[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)嗜鹽脂肪酶的嗜鹽古生菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810235853.8
• 申請(qǐng)日: 2008-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN101892169A
• 公開（公告）日: 2010-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許正宏;張曉梅;竇文芳;許泓瑜;張萌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/20;C12R1/01
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高產(chǎn)嗜鹽脂肪酶的極端嗜鹽菌菌株，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

脂肪酶廣泛應(yīng)用于洗滌劑、食品、醫(yī)藥、制革、紡織等領(lǐng)域。脂肪酶生物技術(shù)應(yīng)用于被污染環(huán)境的生物修復(fù)以及廢物處理是一個(gè)新興的領(lǐng)域。石油開采和煉制過程中產(chǎn)生的油泄漏，油脂加工過程中產(chǎn)生的含脂廢物以及飲食業(yè)產(chǎn)生的廢物，都可以用不同來源的脂肪酶進(jìn)行有效的處理。脂肪酶在生物修復(fù)受污染環(huán)境中獲得了廣泛應(yīng)用。一項(xiàng)歐洲專利報(bào)道了利用脂肪酶抑制和去除冷卻水系統(tǒng)中的生物膜沉積物。?

隨著海水代用工程的發(fā)展，高鹽污水的生物處理成為研究的熱點(diǎn)，而普通微生物及其酶類在高鹽條件下的應(yīng)用受到限制，嗜鹽菌及其嗜鹽脂肪酶的應(yīng)用將為高鹽污水處理提供新的工具。?

極端嗜鹽菌是生長(zhǎng)在高鹽極端環(huán)境的一類微生物，主要存在于鹽湖、鹽堿湖、鹽沼、死海和鹽場(chǎng)等環(huán)境中。Baratti等人2006年首次報(bào)道了嗜鹽古生菌Natronococcus?sp.產(chǎn)嗜鹽脂肪酶，酶活力達(dá)到50U/L。所以拓寬嗜鹽脂肪酶的來源，提高產(chǎn)酶能力以提高其應(yīng)用價(jià)值成為研究的熱點(diǎn)，?

發(fā)明內(nèi)容

【要解決的問題】?

本發(fā)明的目的是提供一種可以在高鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中大量積累脂肪酶的Haloterrigena?sp.屬嗜鹽古生菌菌株。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明人從來自鹽湖的菌種樣品中篩選獲得了一株嗜鹽脂肪酶產(chǎn)生菌，對(duì)這株菌進(jìn)行了發(fā)酵研究。?

脂肪酶產(chǎn)生菌篩選培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基：?

篩選培養(yǎng)基(g/L)：NaCl?200.0；KCl?2.0；MgSO₄.7H₂O?20.0；FeSO₄.7H₂O?0.04；酪蛋白氨基酸7.5；酵母粉10.0；檸檬酸三鈉3.0；橄欖油10.0若丹明B1.0；pH?7.5?

發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：NaCl?200.0；KCl?2.0；MgSO₄.7H₂O?20.0；FeSO₄.7H₂O?0.04；酪蛋白氨基酸7.5；酵母粉10.0；檸檬酸三鈉3.0；橄欖油10.0；pH?7.5?

經(jīng)過平板初篩和搖瓶復(fù)篩獲得的嗜鹽古生菌在高鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落表面光滑，邊緣整齊，紅色。革蘭氏染色陰性，鏡檢為桿狀。為鑒定其類型，分別對(duì)其進(jìn)行了分子鑒定和生理生化鑒定，該菌好氧或兼性厭氧，生長(zhǎng)溫度范圍為30～60℃，最適生長(zhǎng)溫度為42℃；適宜生長(zhǎng)pH范圍6.0～9.0，最適生長(zhǎng)pH?7.0；在0.5～5.2mol/L?NaCl范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)濃度為3.5mol/L。該菌僅能較好的利用蔗糖、果糖，淀粉水解試驗(yàn)、明膠水解試驗(yàn)、酪素降解試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)呈陽(yáng)性；吲哚試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)呈陰性。該菌株16S?rDNA全長(zhǎng)序列為1581bp(GenBank登錄號(hào)EU557270)，與具有最高同源性的菌株Haloterrigena?thermotolerans?strain?10R(GenBank登錄號(hào)AY994199)的相似度為99％，結(jié)合形態(tài)特征和生理生化特性，將其鑒定為嗜鹽古生菌Haloterrigena?sp.，命名為Haloterrigena?sp.Z4。該生物材料保藏信息：該極端嗜鹽菌的分類名稱為Haloterrigena?thermotolerans，保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委?員會(huì)普通微生物中心簡(jiǎn)稱中國(guó)微生物菌種保藏中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路(中科院微生物研究所)，保藏日期為2008年4月21日，保藏編號(hào)CGMCC?No2463。?

在發(fā)酵研究過程中發(fā)現(xiàn)，該菌可以以橄欖油、花生油、芝麻油、菜籽油、茶油為誘導(dǎo)物產(chǎn)脂肪酶，添?加1％橄欖油，42℃、pH?7.5、NaCl濃度3.5mol/L時(shí)產(chǎn)酶最高，達(dá)到22U/ml。?

附圖說明：

圖1不同誘變物對(duì)產(chǎn)酶的影響?

圖2NaCl濃度、pH和溫度對(duì)產(chǎn)酶的影響?

【有益效果】?

提供了一種具有工業(yè)應(yīng)用潛力的高產(chǎn)嗜鹽脂肪酶的優(yōu)良菌株。?

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：嗜鹽脂肪酶高產(chǎn)菌株的篩選?

將菌種轉(zhuǎn)接活化，37℃培養(yǎng)，挑取單菌落并點(diǎn)種于橄欖油-若丹明B平板37℃培養(yǎng)7～14天，挑選有熒光圈的菌落經(jīng)劃線分離后獲得單菌落，接種于斜面培養(yǎng)基保存并進(jìn)行搖瓶發(fā)酵復(fù)篩。?

實(shí)施例2：脂肪酶酶活的測(cè)定?