[發(fā)明專利]肌酐診斷/測定試劑(盒)及肌酐濃度測定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810235696.0
• 申請(qǐng)日: 2008-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN101762497A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/17;G01N33/48;C12Q1/26
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種肌酐診斷/測定試劑(盒)，同時(shí)本發(fā)明還涉及測定肌酐濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

測定肌酐主要有化學(xué)測定法(Jaffe法)、酶法、高效液相層析法和毛細(xì)管電泳法等。

化學(xué)測定法成本低廉，操作簡便，是目前國內(nèi)測定肌酐最常用的方法之一。標(biāo)本中的肌酐與苦味酸鹽作用生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物。此法的缺點(diǎn)是特異性不高，維生素C、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴以及高濃度葡萄糖、蛋白質(zhì)和一些抗生素如青霉素G、頭孢西丁、頭孢唑啉等也能與堿性苦味酸反應(yīng)生成紅色。

高效液相層析法(HPLC)，肌酐在弱酸性環(huán)境中帶正電荷，通過陽離子交換層析柱可與其他成分很好分離，在234nm測定其光吸收。此法分析的精密度高、特異性好，但本法不適于大批量臨床標(biāo)本分析，通常作為肌酐測定的參考方法，用于評(píng)價(jià)市售肌酐測定的試劑盒和某些科研目的。檢索發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)枮?0106198.0、申請(qǐng)日為1990.12.18的中國專利申請(qǐng)公開了用高效液相色譜直接測定人尿中假尿嘧啶核苷(簡稱假尿苷)，再通過分光光度法同時(shí)測出肌酐，分別用假尿苷和假尿苷/肌酐作為鼻咽癌和肺癌的標(biāo)志物。(這個(gè)專利和我們的無關(guān))

毛細(xì)管電泳法，血清標(biāo)本用高速離心作預(yù)處理，尿液標(biāo)本可用低速離心，除去有形成分，上清液用膠束動(dòng)電毛細(xì)管電泳分離后測定235nm處吸光度。本法測定線性范圍寬，操作較為簡便，但需用特殊設(shè)備和進(jìn)行血清標(biāo)本的預(yù)處理，臨床常規(guī)使用困難。

酶學(xué)測定法主要有肌酐脫亞胺酶(Creatinine?deiminase)和肌酐酶(Creatininase)兩大類。

檢索發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)枮?2139298.6、申請(qǐng)日為2002.11.15的專利申請(qǐng)公開了應(yīng)用酶反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶配制的測定試劑。該發(fā)明所指的酶法測定試劑并不加入測定反應(yīng)所需的還原型煙酰胺輔酶或其類似物，而加入其反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰胺輔酶或其類似物及其相應(yīng)的生成還原型輔酶所需的酶和底物系統(tǒng)，通過在試劑內(nèi)形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反應(yīng)系統(tǒng)，將這類氧化型輔酶或其類似物緩慢循環(huán)還原為還原型煙酰胺輔酶或其類似物，當(dāng)被還原的還原型煙酰胺輔酶或其類似物達(dá)到一定的濃度時(shí)，該發(fā)明所指的酶法試劑就可達(dá)到測定樣本中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的目的。該發(fā)明的特點(diǎn)在于為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等的測試提供一個(gè)內(nèi)源合成丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑、尿素養(yǎng)試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等反應(yīng)所需要的底物-還原型煙酰胺輔酶。其缺點(diǎn)之一為，這個(gè)系統(tǒng)在生成反應(yīng)所需要的還原型煙酰氨輔酶的同時(shí)，也抵消了部分丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的活性，造成試劑測試的準(zhǔn)確性大大降低。其缺點(diǎn)之二是，該試劑在正式測試前必須事先反應(yīng)一段時(shí)間，以便能夠產(chǎn)生足夠的還原型煙酰氨輔酶，這樣一來就造成了緩不濟(jì)急的結(jié)果，給測試帶來很大的不便。

據(jù)申請(qǐng)?zhí)枮?2139298.6、申請(qǐng)日為2002.11.15的專利介紹，該系統(tǒng)由于不斷生成測定所需的NADH或NADPH，從而大大提高了試劑的穩(wěn)定性，并大大降低試劑的生產(chǎn)成本。其實(shí)在試劑中加入NADH或NADPH的穩(wěn)定劑已經(jīng)不是困難或增加成本的問題，反而比在試劑中增加一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)要經(jīng)濟(jì)得多。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計(jì)量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定肌酐濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的肌酐診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行肌酐濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明肌酐濃度測定方法如下：

肌酐+水?肌酐脫亞胺酶?N-甲基海因+氨

氨+2水+6氧化型鐵氧還蛋白?鐵氧還蛋白亞硝酸還原酶

?????????????????????????亞硝酸+6還原型鐵氧還蛋白

亞硝酸+水+輔酶?硝酸還原酶?硝酸+還原型輔酶