[發明專利]同型半胱氨酸診斷/測定試劑(盒)及同型半胱氨酸濃度測定方法

無效

• 申請號: 200810235623.1
• 申請日: 2008-12-10
• 公開（公告）號: CN101762470A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/17;G01N33/48;C12Q1/26
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技術領域

本發明涉及一種同型半胱氨酸診斷/測定試劑(盒)，同時本發明還涉及測定同型半胱氨酸濃度的方法，屬于醫學檢驗測定技術領域。

背景技術

測定血漿中同型半胱氨酸的方法有很多種，包括高效液相色譜法(HPLC)、氨基酸分析儀測定法、離子色譜法、酶聯免疫分析法(EIA)、毛細管氣相色譜-質譜，熒光偏振免疫分析(FPIA)、電化學法及酶法等等。

1.高效液相色譜法(HPLC)：是經典的參考方法，但其有操作比較復雜，試驗耗時比較長，試驗數據變異比較大的缺點，在臨床應用方面逐漸被酶聯免疫分析法、熒光偏振分析法和酶法所取代。高效液相色譜法是：先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉變成還原形式，然后與熒光劑進行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質復合物，將衍生后的樣品進行色譜分析。因色譜固定相對不同物質的吸附力不同，因此流動相將其洗脫下來的次序也不同，根據這一原理將樣品中的不同物質分開，以熒光檢測器檢測洗脫下同型半胱氨酸-熒光物質復合物的熒光強度，將其與標準品/內標的比值進行比較和計算，就可以測定血總同型半胱氨酸的水平。

2.酶聯免疫分析法(EIA)：是臨床上測定同型半胱氨酸水平的常用方法，其特點是操作比較方便、快捷，重復性好，方法穩定可靠。缺點是大部分操作還是手工操作，比較耗時等。酶聯免疫分析法其基本分析原理：先使用酶將血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉變成S-腺苷-L-同型半胱氨酸，然后加入酶標的抗S-腺苷-L-同型半胱氨酸的單克隆或多克隆抗體，采用競爭結合的原理，將不同水平的標準品與酶標抗體競爭結合，然后以顯色試劑和終止試劑分別進行顯色和終止，制作出同型半胱氨酸濃度與發色強度的標準曲線。樣品也按相同步驟處理，在標準曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。

3.離子色譜法：主要用于實驗研究，臨床上較少使用。其基本分析原理是色譜分析的一種，主要是其固定相采用離子交換物質，根據其對不同離子的吸附力不同可將同型半胱氨酸與其它物質分開進行測定。

4.毛細電泳法：主要用于實驗研究，有在臨床使用的報道。其特點與高效液相色譜方法相似，如其有操作比較復雜、試驗耗時較長和試驗數據變異比較大的缺點。基本分析原理：先使用還原劑使血樣中所有形式的同型半胱氨酸轉變成還原形式，然后與熒光試劑進行衍生生成同型半胱氨酸-熒光物質復合物，將衍生后的樣品進行毛細電泳分析。將樣品放置于10千伏左右的高壓電場中，因為各種物質所帶電荷不同，其等電點也不相同，因此其在電場中的遷移速度也就不同，根據這一原理可將同型半胱氨酸與樣品中的其它物質分開，再以熒光檢測器檢測同型半胱氨酸-熒光物質復合物的熒光強度，將其與標準品/內標的比值進行比較和計算，就可以測定總同型半胱氨酸的水平。

5.熒光偏振法：是臨床上測定同型半胱氨酸水平的比較好的方法，該方法完全自動化儀器分析，具有快速、準確、方便的優點。其基本分析原理：樣品中游離同型半胱氨酸和抗單克隆抗體相結合的同型半胱氨酸的熒光偏振強度不同，將樣品、標準品與標抗體競爭結合，采用競爭結合的原理制作出同型半胱氨酸濃度與熒光偏振強度的標準曲線，在標準曲線上就可以查出其同型半胱氨酸的濃度。

6.酶法：是因應市場需求而新開發出來的測試方法，目前國內有多項專利申請：CN98807531.8利用同型半胱氨酸酶來測量樣品中同型半胱氨酸含量；CN200410016789.6利用同型半胱氨酸轉甲基酶(E.C.2.1.1.10)及腺苷同型半胱氨酸酶(E.C.33.1.1)的循環擴增作用，再加上腺苷脫氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶等，或腺苷脫氨酶、羥丁酸脫氫酶等顯色反應測定同型半胱氨酸含量；CN200510053210.8利用L-蛋氨酸γ-裂解酶作用于同型半胱氨酸使之產生硫化氫后再與瑩光化合物DMPD2HCl作用產生熒光，該方法使用全自動熒光分析儀測試，具有快速、準確、方便的優點。其基本分析原理：用基因重組酶將同型半胱氨酸分解，所形成之硫化氫產物再與熒光顯色劑發生化學反應形成可測量之熒光化合物。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定同型半胱氨酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的同型半胱氨酸診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行同型半胱氨酸濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。