[發明專利]高通量核酸分子克隆制備分子克隆芯片的方法

無效

• 申請號: 200810235583.0
• 申請日: 2008-11-21
• 公開（公告）號: CN101413034A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 周東蕊;陸祖宏
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 陸志斌

1.一種高通量核酸分子克隆制備分子克隆芯片的方法，其特征在于制備步驟為：

a.將待克隆核酸分子模板與核酸擴增反應體系試劑混合得擴增混合物溶液，使得每微升擴增混合物溶液中含有的核酸模板分子數量為10⁶～10⁷，所述核酸擴增反應體系試劑中的引物5’端修飾有生物素、醛基、丙烯酰胺基或氨基化學基團；

b.向上述擴增混合物溶液中加入高分子化合物，所述高分子化合物能夠在降低溫度后使得溶液凝固成凝膠狀；

c.向步驟b所得溶液中加入兩倍其體積的油相進行乳化，得到油包水的乳濁液，乳液顆粒的粒徑為5μm±2.5μm，所述油相的體積比組成為95％礦物油、4.5％?Span?80、0.4％?Tween80、0.1％?Triton-X-100；

d.將步驟c所得乳濁液置于PCR儀或恒溫器中，進行核酸擴增反應；

e.核酸擴增反應結束后，降低乳濁液溫度，直至上述乳濁液中的溶液凝固成顆粒，形成核酸分子克隆顆粒；

f.將步驟e所得乳濁液中的油相去除，分離出核酸分子克隆顆粒；

g.將步驟f所得核酸分子克隆顆粒隨機分散在固相載體上，然后升高固相載體溫度，直至核酸分子克隆顆粒溶解，使溶液中的核酸擴增產物固定在固相載體上，然后清洗去除高分子化合物，在固相載體表面上形成核酸分子克隆陣列，由此得到克隆芯片。

2.根據權利要求1所述的高通量核酸分子克隆制備分子克隆芯片的方法，其特征在于所述被克隆模板是單雙鏈線形或單雙鏈環形的DNA、RNA、PNA或LNA。

3.根據權利要求1所述的高通量核酸分子克隆制備分子克隆芯片的方法，其特征在于所述核酸擴增反應是乳液PCR擴增、乳液RT-PCR擴增或乳液滾環擴增。

4.根據權利要求1所述的高通量核酸分子克隆制備分子克隆芯片的方法，其特征在于所述核酸擴增反應溶液中加入的高分子化合物是淀粉、瓊脂糖或丙烯酰胺。