[發明專利]大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的制備及應用

無效

• 申請號: 200810233774.3
• 申請日: 2008-12-30
• 公開（公告）號: CN101457246A
• 公開（公告）日: 2009-06-17
• 發明（設計）人: 趙榮華
• 申請（專利權）人: 云南中醫學院
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56;A61K31/704;A61P31/04;C12R1/845
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及藥品技術領域，具體地說是大黃素轉化產物的大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷制備(提取和分離方法)及應用。

背景技術

大黃素(Emodin)化學名為1，3，8—三羥基—6甲基蒽醌9，10—Anthrancenedione，1，3，8—6—methyl—。分子式為C₁₄H₁₀O₅，相對分子質量為270.23。為橙色針狀結晶(乙醇或減壓升華)，熔點256～257℃。幾乎不溶于乙醇及堿溶液。大黃素是何首烏中的有效成分之一，資源豐富，來源十分廣泛，可從蓼科植物何首烏Polygonummultiflorum?Rheld.掌葉大黃Rheum?palmatum?L.根莖、齒果酸模Rumex?dentatus?L.根和葉、鄒皮酸模R.crispus?L.等植物的根中提取得到，而且提取工藝、純化十分簡單。現代研究表明大黃素具有抑菌、瀉下、利尿、解痙、抗炎、止咳、抗腫瘤的作用。臨床上常用于糖尿病，腎病，胃腸功能衰竭，便秘，急性胰腺炎等。大黃素作用廣泛，安全性高，小鼠灌胃LD₅₀為560mg/kg。但由于大黃素水溶性差，限制了大黃素的應用。以大黃素為基本結構，進行結構修飾以增強大黃素活性，擴大應用范圍是一項重要的研究工作。

以大黃素作為母體進行結構修飾，國內外做了許多研究工作。德國Lars?Teich等人以大黃素作為原料，用DIB進行結構修飾，獲得8個衍生物，其中一個衍生物1，3，8三羥基-6-甲基蒽醌具有很強的抗腫瘤活性。Demirezer等人發現大黃素及其衍生物，對多種腫瘤細胞有抑制作用。趙蔡斌采用量子化學的AM1算法計算了12個大黃素衍生物的分子結構參數，利用逐步回歸分析建立構效關系模型，成功建立了大黃素衍生物抗腫瘤活性的構效關系模型。大黃素衍生物抗腫瘤活性與分子體積V、極化率α及C環上凈電荷QC相關。張弘等人在實驗室內以天然存在的大黃素(emodin)為原料合成了甲基化衍生物大黃素甲醚(physcion)和三甲氧基大黃素(trimethoxyemodin)，并進行了殺菌和殺蟲活性研究，發現3個蒽醌類化合物對黃瓜白粉(Sphaerotheca?fuliginea)的活性有明顯差異。譚嘉恒等人以大黃素為母體，在其側鏈上設計合成了一類新型含氮的大黃素衍生物，包括疊氮化合物、甲基氨化合物和季銨鹽化合物。生物活性研究表明，這類衍生物具有良好的抗腫瘤活性。

目前大黃的結構修飾主要采用化學方法，得到多個衍生物，目的是尋找更有效抗腫瘤活性的藥物和殺蟲劑，未見進行抗菌的實驗研究。應用化學方法進行結構修飾存在選擇性不強，副產物多，后期分離困難，設備投資大，技術要求高，大量使用有機溶劑，存在環境污染的隱患。

發明內容

本發明的目的是提供一種大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法，以及大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的應用。

本發明的技術方案為：用米根霉Rhizopus?oryzae、菌株XMS-010兩個菌株對大黃素進行轉化、提取大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、并通過硅膠柱層析和重結晶等方法對其中成分進行分離的方法。具體如下：

一、大黃素轉化產物的培養

用菌種米根霉Rhizopus?oryzae活化后接種到PDA斜面培養基，0-4℃保存；分別準確稱量大黃素25mg，放入50個潔凈的500mL葡萄糖瓶中，再分別倒入MM培養液100mL，121℃高壓滅菌20min；滅菌后待培養液涼至室溫，與無菌操作條件下分別將米根霉菌種接入，放入恒溫培養振蕩器中，28℃，180r/min振蕩搖瓶培養，至培養液由桔紅色混懸液變透明時，再培養24h將搖瓶從恒溫培養振蕩器取出培養液。

二、大黃素轉化產物的提取分離

1)大黃素轉化產物的提取：將已發酵好的培養液合并收集，濃縮，用乙酸乙酯反復萃取三次，萃取液濃縮干燥，得萃取物；

2)大黃素轉化產物的分離：取柱層析硅膠(200-300目)用氯仿：甲醇＝30：1拌和裝柱，用氯仿：甲醇30：1洗脫液平衡柱體(一般2倍柱體積)；萃取物干法拌樣上硅膠柱層析，以洗脫液梯度洗脫，根據情況分別來收集各餾分，然后根據TLC分析結果進行各餾分間的合并和濃縮；以氯仿:甲醇＝30～20:1多次洗脫，得組分A，經檢測為大黃素；氯仿:甲醇10:1～6:1洗脫，得組分B，經檢測為大黃素轉化后的新產物。

三、大黃素轉化產物的鑒定

1.鑒定

1)光譜數據