[發明專利]一種白及可控遺傳因子的質量控制方法

無效

• 申請號: 200810233561.0
• 申請日: 2008-11-13
• 公開（公告）號: CN101401544A
• 公開（公告）日: 2009-04-08
• 發明（設計）人: 周敏;宋天順;黃春球;趙東
• 申請（專利權）人: 云南植物藥業有限公司
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;G01N33/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域

本發明涉及一種白及可控遺傳因子的質量控制方法，屬于生物技術領域。

二、背景技術

白及【Bletilla?s?triata(Thunb.)Reichb.f】，屬蘭科，多年生草本。原產中國，廣布我國西南、東南及華北大部分地區，生于海拔110m-3200m的林下、溝谷巖石縫中，耐陰性強。性微寒，味苦、甘、澀，具有收斂止血，消腫生肌之功效，白及收載于《中國藥典》2005年版一部。白及既是是我國傳統名貴藥材，也是我國現代醫藥工業的重要原材料，其系列產品有白及顆粒、白及糖漿、白及片、白及膠囊等。我國白及原料年需求量在4500-5000噸左右，由于白及的自然繁殖、生長較慢，采挖后幾乎不可再生，而對白及的開發利用范圍逐步擴大，原料需求劇增，白及的自然產出與利用之間的矛盾凸現，價格連年攀升，由2000～2002年的13～14元/kg上升到2008年的75-90元/kg，而且價格還在繼續上走。由于白及至今尚未實現人工規模化種植，因此，臨床中醫和現代醫藥工業所用的白及原料全部來源于自然界，從而導致白及自然資源日趨減少，成為瀕危物種，市場供需矛盾日益突出。目前，白及已被列入瀕危動植物種國際貿易公約(CITES)和國家二級珍稀瀕危保護植物。

人工種植白及是緩解資源矛盾，培植新型生物產業的有效途徑。目前，白及人工種植方法多使用塊莖繁殖，3-4年采收，投入成本高，而且采用塊莖繁殖白及根腐病發生頻率高，發芽率低，效益不明顯，產品生產年限長，技術難以推廣應用。另外，通過白及組織培養可以達到種苗快速繁殖與降低根腐病的目的，但是組培苗成本很高，每株苗0.20元以上，也是難以推廣。無菌播種繁育是當前能解決白及人工種植種苗來源的首選途徑。無菌播種繁育系通過人工授粉結實，在無菌條件下播種培育獲得種苗，種苗成本低廉，每株不足0.02元，是較理想的白及種苗繁育方式。但是常規的無菌播種繁育存在著成苗較少、成苗率低、成苗時間較長等問題，解決這些問題的關鍵是獲得優良種子，而優良種子取決于其優質的遺傳因子，保證優良的遺傳因子需要有效、可控的質量控制方法。本發明找到一種從大量的白及花粉中選出優質生活力的花粉，通過微波輻射處理，增加花粉淀粉酶、轉氨酶、蛋白酶等的活性，促進蛋白質、游離氨基酸、DNA的合成，用妥當的方法進行保存，經過人工授粉，產出大量飽滿、萌發率高、活性強的白及種子，最終為白及無菌繁育提供優良種子。本發明從源頭上解決了白及優良種子的難題，具有易操作、效果好、成本低、易推廣等優點，為白及實現大規模人工種植提供優良種苗起到至關重要的作用。

三發明內容

一種白及可控遺傳因子的質量控制方法，本發明按以下步驟進行操作：

1、使用0.3-0.8％TTC染色法測定白及花粉活力：

在天氣晴朗無風的早晨，隨機選取15朵花的花粉，各0.2克，使用細膩毛筆操作，稱重后在載玻片上滴1-2滴0.5％TTC溶液制成臨時觀察樣本，于40×10倍光學顯微鏡下觀測，每個3次重復，每次重復觀測10個視野，10個視野中平均著色的花粉粒占花粉粒總數的85％以上即為優質花粉，計算3次平均值，得出生活力最佳的花粉。

2、將選取的優質白及花粉進行微波處理：

將選取的優質白及花粉用清水浸泡1-5h，自然晾干后用微波爐(2450MH，WD700)輻照種子8s劑量為1.26mw/mm²，存放于培養皿，然后在25℃光照培養箱進行沙培，細沙經0.1％HgCl消毒。

3、將經處理的白及花粉進行保存：

在裝花粉的培養皿中裝入一定量的變色硅膠，數量根據空氣濕度計來確定，將空氣濕度控制在60％-70％之間，濕度確定后密封培養皿，然后將其放入-5℃～-10℃的冰箱中進行保存。

4、定期檢驗白及花粉活力：

每隔兩星期及在進行人工授粉前，同樣使用0.3-0.8％TTC染色法測定其花粉活力，以確定白及花粉活力。

5、通過人工授粉，結實率可達98％以上，是花粉不經過處理繁育的約10倍。

6、通過無菌播種繁育，成苗率達到95％以上，是花粉不經過處理繁育的5-7倍，成苗時間縮短了一半時間，為2-3個月。

四、具體實施方式

實施例1：白及可控遺傳因子的質量控制方法，按以下操作步驟進行：

1、使用0.3％TTC染色法測定白及花粉活力：