[發明專利]一種鏈霉菌發酵三七皂苷制備20(S)-人參皂苷Rh1的工藝

有效

• 申請號: 200810233482.X
• 申請日: 2008-10-27
• 公開（公告）號: CN101508965A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發明（設計）人: (請求不公開姓名)
• 申請（專利權）人: 昆明諾唯金參生物工程有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P33/00;C12R1/54
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物、醫藥技術領域，涉及一種鏈霉菌發酵轉化各種三七皂苷中的三醇組人參皂苷、制備20(S)-人參皂苷Rh₁(6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人參三醇，以下簡稱Rh₁)的方法。特別提供一株人工馴化的弗氏鏈霉菌(Streptomyces?fradiae)菌株NTGA-334，以及用該菌株在發酵罐中發酵轉化各種三七皂苷、分離提取Rh₁的方法。

背景技術

人體代謝實驗表明，人參皂苷口服后，在胃液、膽汁的作用下僅發生了輕微的氧化作用，不能被降解，只有在腸道菌的作用下，糖苷鍵才發生斷裂，形成了一系列代謝產物。最新的藥理學研究表明：被吸收入血并發揮活性的不是人參皂苷本身，而是經腸道菌群代謝轉化后的代謝產物(Tawab?MA，et?al：Drug?Metab?Dispos，2003，31(8)，1065-1071)。目前普遍認為Rh₁是天然三醇組人參皂苷在體內代謝后的主要活性產物之一，而Rg₁、Re和R₁等可能是天然前體藥物。近年來的體內體外試驗研究發現，Rh₁除了具有抗腫瘤活性外(KimYS，et?al：MicrobiolBiotechnol，2008，18(6)，1109-1114；王毅，等：中國免疫學雜志，2003，19(4)，248-252；陳聲武，等：吉林大學學報(醫學版)，2003，29(1)，25-28.)，還具有抗炎、抗過敏(Shin?YW，et?al：PlantaMed，2006，72(4)，376-378；Park?EK，et?al：Int?Arch?Allergy?Immunol，2003，133(2)，113-120；ParkYC，et?al：Biochem?Mol?Biol?Int，1996，40(4)，751-757.)、免疫調節(王毅，等：中國免疫學雜志；2007，23(1)，46-52；王毅，等：藥學學報，2002，37(12)，927-929.)以及弱植物雌激素等藥理活性(Bae?EA，et?al：Biol?Pharm?Bull，2005，28(10)，1903-1908；Lee?YJ，et?al：Steroid?Biochem?MolBiol，2003，84(4)，463-468.)，因此對它的研究越來越受到重視。

在制備小組分人參皂苷和人參皂苷代謝物的方法中，經典的化學法(化學合成、酸水解或堿裂解)不可避免地產生一些副反應，如差向異構化、水合和羥基化(Han?BH，et?al：PlantaMed，1982，44(3)，146-149；Chen?Y，et?al：Chem?Pharm?Bull，1987，35(4)，1653-1655)；通過酶轉化三醇組人參皂苷來制備Rh₁，具有轉化率高和操作簡便的優點(Ko?SR，et?al：Planta?Med，2003，69(3)，285-286；Ko?SR，et?al：Chem?Pharm?Bull，2003，51(4)，404-408；Ko?SR，et?al：BiosciBiotechnol?Biochem，2000，64(12)，2739-2743.)，但價格昂貴，存在酶源不便、成本高的問題，因此應用受到限制。涉及鏈霉菌發酵轉化各種三七皂苷中的三醇組人參皂苷、大批量制備Rh₁的研究，國內外尚未見文獻報道。

發明內容

為了簡便、高效、規模化發酵制備Rh₁，本發明提供的轉化微生物是一株由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏的弗氏鏈霉菌(Streptomyces?fradiae)菌株NTGA-334，菌株保藏編號為CGMCC?No.2074，保藏日期為2007年6月7日。該菌株已申請專利保護(專利申請號：200710066011.X)。

在本發明鏈霉菌發酵各種三七皂苷制備Rh₁的方法中，弗氏鏈霉菌(Streptomyces?fradiae)菌株NTGA-334經過長時間的馴化培養后對營養的要求不高，可在高氏一號、ISP2、腐質酸或天門冬酰胺培養基上生長。