[發明專利]附睪蛋白酶抑制劑的功能肽段及利用該功能肽段構建的多重抗原肽

無效

• 申請號: 200810232894.1
• 申請日: 2008-10-20
• 公開（公告）號: CN101397332A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發明（設計）人: 何畏;梁志清;孫黎黎;吳玉章;李晉濤;李彥鋒
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K14/47;A61K39/00;A61P15/16
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及附睪蛋白酶抑制劑的功能肽段及利用 該功能肽段構建的多重抗原肽。

背景技術

人口、資源和環境問題是嚴重影響本世紀人類生存和經濟社會發展的關鍵 問題，避孕節育研究受到極大重視。迄今為止，男性避孕方法還局限于傳統的 體外排精、絕育術和使用避孕套等，尚無高效、方便、安全、可逆的避孕新措 施問世。

幾十年來，研究者都試圖以生殖相關激素和精子特異性蛋白為靶抗原，將 免疫方法應用于男性生育控制，但仍存在諸多問題，如尚未找到最佳的特異性 靶抗原，天然抗原的弱抗原性和免疫耐受，免疫避孕效果不理想等。這些問題 已成為避孕疫苗發展和應用的巨大障礙。

2001年，人類附睪蛋白酶抑制劑(epididymal?protease?inhibitor，Eppin) 首次被發現，其在睪丸和附睪中優勢表達，主要分布于精子表面和精漿中。用 保留羧基端的Eppin截短蛋白免疫的雄性獼猴出現可逆性的不育(避孕率7/9， 可逆率5/7)，精液分析發現精子的前向運動能力減弱，而精子的數量及體內雄 激素水平不受影響，亦未見自身免疫性疾病的發生，表明Eppin是一種極有發 展前途的靶抗原，但其為自身抗原，故仍存在免疫原性弱和免疫耐受等問題， 此外，未對Eppin中可能導致遠期毒副反應的不良肽段做剔除或加工。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供Eppin的功能肽段，選自SEQ?ID?No.1 或SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列。

本發明的目的之二在于提供利用所述Eppin的功能肽段構建的多重抗原肽， 由下式表示：

B₂K或B₄K₂K或B₈K₄K₂K

其中：

B是附睪蛋白酶抑制劑的功能肽段，選自與SEQ?ID?No.1具有至少80％序列 相同性的多肽或/和與SEQ?ID?No.2具有至少80％序列相同性的多肽；

K是雙官能單元。

進一步，所述附睪蛋白酶抑制劑的功能肽段選自SEQ?ID?No.1或/和SEQ?ID No.2所示氨基酸序列；

進一步，所述附睪蛋白酶抑制劑的功能肽段，選自SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2 所示氨基酸序列，且兩種序列的摩爾比為1∶1；

進一步，所述雙官能單元選自半胱氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或鳥 氨酸；

進一步，所述雙官能單元為賴氨酸。

本發明的目的之三在于提供一種包含免疫學有效量的所述多重抗原肽的 組合物。

進一步，還包含藥學上可接受的載體。

本發明的目的之四在于提供所述Eppin的功能肽段在制備免疫原中的應 用。

本發明的目的之五在于提供所述多重抗原肽在制備男性避孕疫苗中的應 用。

本發明的有益效果在于：

(1)發明人在分析Eppin的氨基酸序列及蛋白質空間結構的基礎上，結合 免疫信息學相關理論和研究手段，對Eppin的功能肽段進行了篩選和鑒定，本發 明公開了其中兩個功能肽段：B1具有SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列，B2具有SEQ?ID No.2所示氨基酸序列；本發明的功能肽段具有成份單一，結構簡單，激發的免 疫反應針對性強的特點，可用于制備免疫原；

(2)本發明利用Eppin的功能肽段構建了多重抗原肽，研究證實，所得多 重抗原肽可提高功能肽段的免疫原性同時不影響其抗原特異性，能夠刺激機體 產生高滴度的特異于功能肽段的抗體，誘導高效、安全、可逆的抗生育作用， 可用于制備男性避孕疫苗，為男性避孕的臨床主動免疫治療提供新的手段，具 有重要的開發價值和廣闊的應用前景，能夠產生重大的社會效益和經濟效益。

附圖說明

為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本 發明作進一步的詳細描述，其中：

附圖為本發明多重抗原肽的結構示意圖。

具體實施方式