[發明專利]一種在殼聚糖羥基上光化學交聯細胞粘附性肽的方法

有效

• 申請號: 200810229121.8
• 申請日: 2008-11-28
• 公開（公告）號: CN101747450A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 馬小軍;楊艷;劉袖洞;于煒婷
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.一種在殼聚糖羥基上光化學交聯細胞粘附性肽的方法，其特征在于：在 雙功能光敏性交聯劑的作用下，通過紫外光化學激活的基團選擇性接枝反應， 將細胞粘附性肽接枝到殼聚糖的羥基上，在無需氨基保護和脫保護的繁瑣反 應條件下可保留氨基活性，從而形成生物相容性好、可降解、可溶解的靶向 粘附殼聚糖材料；具體步驟如下，

1)按光敏交聯劑與殼聚糖中氨基葡萄糖殘基的物質的量之比為1∶1-1∶50 計量，稱取光敏交聯劑，加入到水、水-乙醇或pH7-9緩沖液中，得光敏交聯 劑溶液；

隨后向光敏交聯劑溶液中加入細胞粘附性肽的水溶液或緩沖液，光敏交 聯劑與細胞粘附性肽的物質的量之比為1∶1-1∶50，光敏交聯劑終濃度1μM -10M，室溫下避光反應60-120min，形成細胞粘附性肽-光敏交聯劑及未反應 的原料的混合液；

2)按光敏交聯劑與殼聚糖中氨基葡萄糖殘基的物質的量之比為1∶1-1∶50 計量，向上述混合液加入殼聚糖溶液，充分混勻后，光照4min-120min；

3)將上述反應后的混合溶液加入到透析袋中，殼聚糖分子量＞透析袋的截 留分子量MWCO＞肽鏈和交聯劑的分子量，透析至透析出的水溶液在254nm 與220nm檢測不到紫外吸收變化時，再將透析袋內得到的溶液冷凍干燥或真 空干燥，得到產物；

所述光敏交聯劑為兩端分別具有特征基團-NHS與-N₃的sulfo-SANPAH、 SANPAH、ANB-NOS或sulfo-SAND。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述將細胞粘附性肽接枝 到殼聚糖的羥基上后通過透析方法分離未反應物質，冷凍干燥或真空干燥得 產物。

3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述殼聚糖溶液為0.1-4％ W/V殼聚糖溶液，Mw＝10kDa-1500kDa，DD＝40％-98％。

4.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述pH7-9緩沖液為：20 mM磷酸鈉緩沖液，0.15M?NaCl；20mM?HEPES；100mM碳酸鹽/重碳酸鹽 緩沖液；或者50mM硼酸鹽緩沖液。

5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述光敏交聯劑與細胞粘 附性肽的物質的量之比1∶1-1∶10；光敏交聯劑終濃度100μM-2M； 400W＞UV＞6W，290-460nm。

6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述細胞粘附肽為含有細 胞粘附因子RGD序列的多肽GRGDY，RGD作為整合素的受體，其選擇性部 分依賴于RGD的構象以及RGD周圍的氨基酸殘基；其序列為：RGD四肽、 五肽、六肽、RGD環肽、雙線肽或RGD模擬肽，肽鏈長度范圍在3-12個氨 基酸殘基，它們均可以采用權利要求1所述方法接枝到殼聚糖上，都是利用 光敏性交聯劑的-NHS酯鍵斷裂與肽鏈的-NH₂發生反應重新生成酰胺鍵。