[發明專利]一種轉sck/cry1Ac雙價抗蟲基因水稻品系科豐8號外源插入片段旁側序列及應用

有效

• 申請號: 200810225724.0
• 申請日: 2008-11-10
• 公開（公告）號: CN101413005A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 謝家建;王奕海;王錫鋒;彭于發
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 張 濤

技術領域

本發明涉及的是一種生物技術領域的基因序列。具體的說，涉及一種轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列。

背景技術

水稻是我國最重要的糧食作物之一，隨著轉基因技術在水稻中的廣泛研究和應用，已經有多個轉基因水稻品系進行了環境釋放，申請商業化種植。對轉基因植物進行品系特異性的檢測是對轉基因植物進行監督管理，保障其健康發展的重要技術基礎。而轉基因植物的外源插入片段的旁側序列是轉基因植物品系最重要的分子特征之一，因此，外源插入片段的旁側序列是建立轉基因植物品系特異性檢測方法的重要技術資料。

目前已經有部分專利和文獻報道了轉基因植物外源插入載體旁側序列，例如：張大兵等人于2006年利用TAIL-PCR方法分析了玉米品系MON863的外源插入片段的旁側序列，建立了轉基因MON863玉米的品系特異性檢測方法，謝家建等人于2007年利用TAIL-PCR、genomewalking和LD-PCR等方法獲得了轉基因水稻克螟稻、Bt汕優63和科豐6號的外源插入片段的旁側序列，并建立了品系特異性的檢測方法。然而，在對現有的專利和文獻的分析中發現，還沒有任何關于轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列的文章和專利報道。

發明內容

針對上述領域中的空白，提供了一種轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列。

進一步，本發明還提供該轉基因品系特異性的PCR檢測方法。

一種轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列，所述旁側序列為5’端旁側序列，其特征在于：5’端旁側序列如SEQ?ID?NO1所示。

一種轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列，所述旁側序列為3’端旁側序列，其特征在于：3’端旁側序列如SEQ?IDNO2所示。

5’端旁側序列的制備方法，其特征在于提取轉基因水稻品系科豐8號植物基因組DNA，通過TAIL-PCR擴增得到。

3’端旁側序列的制備方法，其特征在于提取轉基因水稻品系科豐8號植物基因組DNA，通過PCR擴增得到。

轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：所述PCR反應中的兩條引物組合為5’端旁側序列的特異性引物：一條引物為依據SEQ?ID?NO1中1-1110位序列設計的正向引物，另一條引物為依據SEQ?ID?NO1的1111-1747位序列設計的反向引物。

所述正向引物為K8P1：5’-ATATTCTGAAGTGGCCTGTT-3’，

所述反向引物為K8P2：5’-TAATAGCGAAGAGGCCCGCA-3’。

轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：所述PCR反應中的兩條引物組合為3’端旁側序列的特異性引物：一條引物依據SEQ?ID?NO2中1-583位序列設計的正向引物，另一條引物依據SEQ?ID?NO2的584-650位序列設計的反向引物。

所述正向序列為K8P3：5’-TGCAAGTCCAGGGATGAAGA-3’，

所述反向序列為G3-P1：5’-TTTATTTGTATAGTGGCGACC-3’。

轉基因水稻品系科豐8號的外源插入片段的旁側序列定性PCR檢測方法，所述PCR反應中同時含有下列引物，

正向引物為K8P1：5’-ATATTCTGAAGTGGCCTGTT-3’，

反向引物為K8P2：5’-TAATAGCGAAGAGGCCCGCA-3’；

正向序列為K8P3：5’-TGCAAGTCCAGGGATGAAGA-3’，

反向序列為G3-P1：5’-TTTATTTGTATAGTGGCGACC-3’。

根據彭海英(彭海英.農桿菌介導的無選擇標記轉雙價抗蟲基因秈稻的獲得.華中農業大學碩士學位論文.2003)報道的用于轉化的載體pCDMARUBAC-Hyg的結構(見圖1)，用于轉化的目的基因(crylAc基因和SCK基因)和選擇標記基因(hpt基因)位于兩個獨立的T-DNA區域，其結構見圖1。其中一個T-DNA由選擇標記基因hpt基因表達盒組成；另一個T-DNA由crylAc基因表達盒和SCK基因表達盒組成。