[發明專利]一種無菌過濾裝置

無效

• 申請號: 200810225512.2
• 申請日: 2008-11-03
• 公開（公告）號: CN101402007A
• 公開（公告）日: 2009-04-08
• 發明（設計）人: 陳福如;楊秀娟;杜宜新;阮宏椿
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: B01D29/085
• 分類號: B01D29/085
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種無菌過濾裝置。

背景技術

真菌、細菌和放線菌等微生物在其生命代謝過程中通常過產生一些抑制或殺死其它病原微生物的物質，我們稱其為抗生素；同樣一些病原微生物在其代謝過程中也會產生一種對寄主或其它生物具有致害作用的物質，我們稱其為毒素。如何順利地將抗生素或毒素等化合物與菌體分離開，以避免微生物菌體本身對研究結果的干擾和影響，是研究抗生素或毒素結構性能和作用機制的前提條件。

通常，在一定的培養條件下，靶標微生物經搖床培養或液體發酵后即可產生代謝產物。如何將微生物菌體與代謝產物成功分離呢？常用的分離方法包括菌體滅活法和濾膜過濾法等，各種方法均存在各自的優缺點。其中菌體高溫滅活法是最常用的一種方法。在操作中通常取適量的菌懸液在120℃高溫滅菌20min，隨后離心去除菌體沉淀，上清液即為代謝產物。但通常代謝產物在高溫條件下不穩定，易分解。如代謝產物為蛋白質或其它遇高溫易分解的化合物時，則通常在60-80℃，30min該化合物即被破壞，直接影響了其活性的大小。若代謝產物為脂多糖及其它小分子化合物，160℃，2-4h才被破壞，可進行高溫滅活。因此，高溫滅活法有它的局限性。

濾膜過濾法是目前提倡使用的一種方法。在操作中通常取適量的菌懸液于注射器中，注射器安裝針頭的部位與微生物過濾器上端相連，通常手動給予注射器一定壓力后，菌懸液經過過濾器內部放置的0.20μm濾膜過濾后匯集在過濾器的下端出口處。收集該出口的液體即為無菌代謝產物。濾膜過濾法可以避免菌體滅活法對代謝產物穩定性和活性的影響。但該方法在實際操作中也存在一些問題：過濾過程壓力不均勻，手動壓力過大，容易使塑料過濾器的濾膜上下兩部分開裂，造成濾液遺漏和污染；手動壓力適中，過濾持續時間較長，手臂連續用力困難。通常加壓5-7分鐘可過濾細菌濃度為10^9-11cfu/mL的菌懸液3-5mL，隨后便需要更換一次過濾器的濾膜，否則因濾膜上部已有菌體覆蓋而將濾膜孔洞完全阻塞，在此情況下繼續給予手動壓力濾液基本難以通過或容易造成過濾器的濾膜開裂，而造成微生物污染。

發明內容

本發明的目的是提供一種簡便有效的無菌過濾裝置。

本發明所提供的無菌過濾裝置，包括具有兩個開口的用于盛裝菌懸液的無菌容器1、內置除菌濾膜的無菌過濾器2，其特征在于：所述過濾裝置還包括與所述過濾器出液口連接的無菌連接管3；

用于盛裝濾液的具有兩個開口的無菌容器5，其中一個開口配有帶孔的無菌膠塞4，另一個開口通過無菌連接管6與負壓引流器7連接；

所述連接管3穿過帶孔的膠塞4，伸入所述盛裝濾液的具有兩個開口的無菌容器5中。

所述過濾裝置還包括彈力夾12。

所述過濾裝置還包括將菌懸液導入所述容器1的組件，該組件具體可包括漏斗架8、漏斗9以及連接管10；所述漏斗9的頸端通過連接管10與所述容器1連接。

所述將菌懸液導入容器1的組件還包括彈力夾11。

所述負壓引流器具體可為最大負壓為1.66kPa的負壓引流袋或負壓引流瓶。

本發明裝置中所有連接均為無菌連接。

利用本發明的無菌過濾裝置進行菌懸液過濾時，應使引流袋處于負壓狀態。將20-30mL濃度為10^9-11cfu/mL微生物菌懸液移入漏斗中，開啟彈力鐵夾11、12，使液體經過連接管(橡膠管)10、無菌容器1至配有0.20μm濾膜過濾器2。由于引流袋中1.66kPa負壓的作用，使無菌容器5內的壓力逐漸均勻降低，微生物代謝產物可自動順利通過濾膜經連接管3進入無菌容器5中，而微生物菌體則被阻隔在濾膜外部。因此抽濾瓶中收集到的液體即為無菌代謝產物，一般30-60min可收集代謝產物15-25mL。隨著抽濾時間的增長，負壓引流器將逐漸膨脹，1h或更長后即會處于負壓釋放狀態，這時可以夾緊彈力鐵夾12，松動引流器出口端橡膠蓋帽，擠壓引流器中的彈簧，將負壓引流器中的空氣排出，使其恢復至負壓狀態。同時需夾緊彈力鐵夾11，更換已滅菌的過濾器濾膜。取100μL經上述步驟過濾的濾液進行涂平板檢測，觀察有無活菌的菌落產生。多次重復試驗表明，使用該無菌過濾裝置均能簡便有效地獲得約15-20mL大容量的無菌濾液。