[發明專利]一種利用60Coγ射線輻照獲得丁醇高產株的方法

無效

• 申請號: 200810223080.1
• 申請日: 2008-09-26
• 公開（公告）號: CN101358187A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 劉宏娟;張建安;劉婭;程可可;周玉杰
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N1/20;C12P7/16;C12R1/145
• 代理公司: 北京華誼知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉月娥

1.一種利用⁶⁰Co?γ射線輻照獲得丁醇生產高產株的方法，其特征在于，工藝步驟包括：

(1)細胞懸液的制備

將斜面培養基上培養好的丁醇產生菌用無菌水洗下，顯微鏡計數調節細胞濃度為5-7×10⁶個/mL；

(2)原生質體的制備

將斜面培養基上培養好的丁醇產生菌接種于完全培養基，30-37℃靜置培養18-24h，添加0.1-0.3％甘氨酸和20-30u/ml青霉素處理2-3h后3000-5000r/min離心5-10min，緩沖液洗滌菌體；收集處理后的菌體懸浮于原生質體穩定液中，加入2-4mg/mL溶菌酶，30-37℃保溫6-8h后終止酶解，3000-5000r/min，離心5-10min，收集原生質體；

(3)⁶⁰Co?γ射線輻照誘變

將制備的細胞懸液或原生質體懸浮于高滲緩沖液中，用⁶⁰Co?γ射線輻照，輻照劑量100-1000Gy，劑量率3-5Gy/min，誘變后稀釋10^-3～10^-6涂布于完全培養基上，于30-35℃黑暗條件下避光培養2-3d；

(4)高產株的篩選

選取致死率在90％以上的輻照劑量輻照的菌株30-37℃有氧培養48-72h后測定丁醇產量，篩選高產菌株。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述丁醇產生菌為丙酮丁醇梭菌Clostridium?acetobutylicum、糖-醋丁基梭菌Clostridium?saccharo-acetoburylicum、費地浸麻梭狀芽孢桿菌Cl.felsineum或丁基梭狀芽孢桿菌Cl.butylicum。

3、按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述完全培養基為：

完全培養基g/L：酵母浸粉3.0，牛肉膏10.0，胰蛋白胨10.0，可溶性淀粉1.0，葡萄糖5.0，L-半胱氨酸0.50，NaCI?5.0，NaAc?3.0，瓊脂粉15，pH8.5。

4、按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述高滲緩沖液的成份為：0.1mol/L?pH?6.0磷酸緩沖液，0.8mol/L甘露醇。