[發明專利]一種鹽酸克倫特羅檢測試紙及其檢測方法

無效

• 申請號: 200810219632.1
• 申請日: 2008-12-03
• 公開（公告）號: CN101458254A
• 公開（公告）日: 2009-06-17
• 發明（設計）人: 周炬華;李紹旭
• 申請（專利權）人: 周炬華;李紹旭
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司
• 代理人: 郝傳鑫

技術領域

本發明涉及獸藥殘留免疫分析技術領域，特別涉及一種鹽酸克倫特羅檢測試紙及其檢測方法。

背景技術

鹽酸克倫特羅(clenbuterol，CLB)又稱瘦肉精、氨哮素、克喘素，是β2-腎上素受體激動劑(簡稱β-興奮劑)。化學名稱為羥甲叔丁腎上腺素，白色或類白色的結晶粉末，無臭、味苦，熔點161℃。該藥物可選擇性地作用于腎上腺素受體，是一種強效激動劑，可引起交感神經興奮，動物吃了含有鹽酸克倫特羅的飼料，能夠改善養分的代謝途徑，促進動物肌肉，特別是骨骼蛋白質的合成，抑制脂肪合成的積累，從而加速動物生長速度，瘦肉相對增加。一般來說，飼料中添加適量的鹽酸克倫特羅以后，可使豬等畜禽生長速度、飼料轉化率、酮體瘦肉率提高10％以上。因此，習慣上稱其為“瘦肉精”。在體內代謝慢，當給動物用藥90天，宰前停藥5天，仍在尿液、血液、肌肉、和肝臟檢出克倫特羅。克倫特羅的化學結構穩定，在體內不會破壞分解，以原形排出體外。污染的肉食品如豬肝食用要經過煮熟，但研究顯示克倫特羅完全耐受100℃高溫。要經過126℃油煎5分鐘才會破壞減半。因此，常規烹調對肉食品克倫特羅殘留不起破壞作用。人類食后發生中毒。臨床表現為心跳加速、四肢顫抖、腹痛頭暈，同時伴有呼吸困難、惡心嘔吐等癥狀。長期食用，可致染色體畸變，誘發惡性腫瘤等。

目前，測定鹽酸克倫特羅的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣/質聯用分析法(GC/MS)、氣相色譜法、薄層色譜法等等。上述這些方法由于其試驗操作煩瑣、時間長，需要經過專業培訓、有豐富經驗的操作人員，所需的儀器設備也比較昂貴、檢測成本高，受限于實驗室內進行，難于在基層普及與推廣，更不適于現場、野外的大規模快速檢測。酶聯免疫吸附測定法(ELISA)也是一種常用檢測技術，ELISA既可檢測多個樣品，也可定性、定量檢測，但目前市場上尚無商品化的此試劑盒出售，而且ELISA需要一定操作經驗的專業人員，其操作過程比較復雜，檢測時間比較長，不同人員操作往往會出現不同的檢測結果，且須配套的酶標板閱讀儀器，很難實施現場檢測。

現有鹽酸克倫特羅免疫層析試紙采用免疫層析競爭法，在檢測的過程中鹽酸克倫特羅和檢測線處固相化的鹽酸克倫特羅偶聯物競爭膠體金標記的單克隆抗體，當樣品中含有5ng/毫升以上的鹽酸克倫特羅時檢測線不顯色，鹽酸克倫特羅含量低于5ng/毫升時檢測線顯色，樣品中鹽酸克倫特羅的含量和檢測線顯色的狀況呈負相關，而人們的判斷思維首先的是正相關，因此極易出現判讀錯誤，且負相關的情況經常出現檢測線是否有顯色而出現不必要的假陰性造成漏檢。

發明內容

本發明的目的在于克服上述技術缺陷，提供一種鹽酸克倫特羅檢測試紙，該試紙結構簡單、使用方便、判讀直觀且成本低，采用顯色與鹽酸克倫特羅藥品含量呈正相關的判讀方法更符合人們的思維模式，并且不會出現假陰性造成漏檢。

本發明的另一個目的在于提供一種應用上述鹽酸克倫特羅檢測試紙檢測鹽酸克倫特羅的方法，該方法簡便快捷，操作簡單，不需要特定儀器設備輔助，易于在中小型企業、基層普及與推廣應用，同時適于現場快速檢測鹽酸克倫特羅。

為實現本發明的目的，采用如下的技術方案：

本發明的一種鹽酸克倫特羅檢測試紙，包括支撐固定粘襯層，在所述支撐固定粘襯層上依次有樣品吸附層、結合墊、微孔虹吸反應層和吸水材料層，在所述結合墊上有示蹤粒子標記的鹽酸克倫特羅抗體和示蹤粒子標記的抗體A，所述抗體A不同于鹽酸克倫特羅抗體；所述微孔虹吸反應層上從所述樣品吸附層端到所述吸水材料層端依次有鹽酸克倫特羅的載體蛋白溶液印跡區和檢測區域，所述檢測區包括檢測溶液印跡區和對照溶液印跡區。

所述示蹤粒子包括膠體金、納米乳膠顆粒、膠體硒、膠體鐵。

所述微孔虹吸反應層為硝酸纖維素反應膜或者聚偏氟乙烯反應膜。

所述鹽酸克倫特羅的載體蛋白溶液為鹽酸克倫特羅與載體蛋白偶聯的復合溶液印跡，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清蛋白、鐵蛋白或血藍蛋白。

所述檢測溶液為鹽酸克倫特羅的二抗溶液。

所述對照溶液為抗體A的二抗溶液。