[發明專利]液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑的制備方法

無效

• 申請號: 200810212929.5
• 申請日: 2008-09-07
• 公開（公告）號: CN101666806A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 肖國偉
• 申請（專利權）人: 上海長島生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及臨床診斷試劑，具體涉及一種液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑的制備方法，該方法還包括液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑的主要組成部分。

背景技術

凝血酶時間(Thrombin?time，TT)是在待測血漿加入一定量的凝血酶試劑，纖維蛋白原變為不溶性纖維蛋白，測定凝固所需的時間。TT是檢測凝血、抗凝及纖維蛋白溶解系統功能的一個簡便試驗，廣泛應用于監控治療高分子量肝素以及纖維蛋白溶解治療，篩選纖維蛋白原紊亂及一些嚴重的纖維蛋白原缺乏病癥，對臨床各科的疾病診斷具有重要意義。

凝血酶時間(TT)檢測的原理是適量的凝血酶將血漿樣品中的纖維蛋白原轉變成纖維蛋白，從而使血漿凝固，凝固所需的時間即為凝血酶時間(TT)。正常的凝血酶時間位于12.0s～18.0s之間，與正常值差別3s以上即為異常。

TT檢測的臨床意義主要表現在：凝血酶時間延長見于血漿纖維蛋白原減低或結構異常，纖維蛋白原降解物(FDP)增多；臨床應用肝素，或在肝病、腎病及系統性紅斑狼瘡時的肝素樣抗凝物質增多；纖溶蛋白溶解系統功能亢進等。凝血酶時間縮短見于血液中有鈣離子存在，或血液呈酸性等。

凝血酶時間檢測測定過程受多種因素的影響，其中試劑的質量是最關鍵因素，由于目前國內的凝血試劑普遍存在產品質量不穩定、敏感性差的問題，致使檢測結果不穩定，不同的臨床檢驗實驗室之間測得的結果難以比較，盡管采用WHO標準參照品，但仍難以把誤差降低到可接受的水平，因此目前臨床實驗室所使用的試劑絕大部分為進口產品，價格昂貴。另一方面，由于液體制劑在使用的過程中不需復溶，不存在因所用水的質量或體積差異給測定結果造成的誤差，有利于測定標準化的實現，因此成為凝血酶時間(TT)檢測試劑的發展方向。

發明內容

(一)發明目的

本發明的目的是提供一種具有敏感性高、使用方便、實驗誤差小、穩定性強、兼容性好的液體型TT檢測試劑的制備方法，最終目的是將應用該方法制成的檢測試劑在臨床檢驗上廣泛應用，使TT檢驗實現標準化。

(二)發明的優勢

本發明采用牛凝血酶為主要原料，采用獨特的穩定系統制備新型液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑。液體試劑具有使用方便的優點，不需復溶，避免各實驗室使用蒸餾水不同、復溶體積不準確而造成的測定偏差；試劑穩定性強，開瓶后37℃能穩定30天以上；同時，該試劑兼容性強，可滿足使用不同型號血凝儀的檢測需要。

(三)發明內容詳述

本發明的特征在于由牛凝血酶、緩沖液和穩定劑制備而成。液體TT檢測試劑中各試劑的終濃度依次為：牛凝血酶(≤5U/mL)，50mM?pH7.5Tris-HCI，0.5％聚乙二醇，0.25％牛血清白蛋白，3％甘油，0.1％羥基丁酸鹽甲苯，0.1％疊氮鈉，40mM氯化鈉，0.1％明膠。

具體實施方式

實施例一：液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑的制備

液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑由牛凝血酶試劑、產品穩定劑和TT緩沖液所組成，其制備方法如下：

1.產品穩定劑的制備

依次稱取5g聚乙二醇、2.5g牛血清白蛋白、1g羥基丁酸鹽甲苯、1g疊氮鈉，溶解于50mM?pH7.5Tris-HCI緩沖液中，加入30mL甘油，混合均勻至外觀為無色透明液體，定容至1L，4℃貯藏備用。

2.牛凝血酶試劑的制備

將牛凝血酶凍干粉(500U/mL，1mL/瓶)用產品穩定劑按比例稀釋為終濃度為5U/mL，4℃貯藏備用。

3.TT緩沖液的制備

稱取6.06gTris堿、2.34g氯化鈉加入蒸餾水適量使之溶解。另取1g明膠加入適量蒸餾水，加熱溶解后并入上述溶液中。然后用濃鹽酸溶液調節pH值至7.5，再用蒸餾水定容至1L，即得TT緩沖液。

制備液體TT檢測試劑主要技術指標如下：

1.外觀：凝血酶試劑(液體)應為無色液體，透明無異物；緩沖液為無色液體，透明無異物。

2.試劑重復性：同一瓶試劑重復測定同一血漿樣品，所測結果變異系數小于3％。

3.試劑批間差：不同瓶試劑測定同一血漿樣品，所測結果變異系數小于8％。

4.試劑穩定性：在2℃～8℃存放不少于18個月。

實施例二：應用液體型凝血酶時間(TT)檢測試劑的檢測方法

取待測血漿100uL，37℃預溫3分鐘，然后分別加入凝血酶試劑100uL(不需預溫)，以CA530血凝儀(日本Sysmex公司產品)或者手動測定凝固時間。

注意事項：

①樣本避免出現泡沫。