[發明專利]連翹酯苷A在制備治療乙型肝炎藥物中的用途

有效

• 申請號: 200810208209.1
• 申請日: 2008-12-25
• 公開（公告）號: CN101757006B
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 玄振玉
• 申請（專利權）人: 山東新時代藥業有限公司
• 主分類號: A61K31/7028
• 分類號: A61K31/7028;A61P1/16;A61P31/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，具體涉及連翹酯苷A的醫藥新用途。

背景技術

連翹酯苷A(Forsythoside?A)是從木犀科連翹屬植物連翹(Fructus?Forsythiae)中提取的有效成分。以前是以連翹苷作為考察連翹提取工藝的指標，近年來隨著連翹有效成分研究的深入，發現連翹苷無抗菌活性，發揮抗菌活性的是連翹酯苷A，其結構式如下：

近年來，有文獻報道，連翹酯苷有良好的抗菌作用：如王宏軍等報道連翹酯苷在體外和體內對引發奶牛乳房炎的主要致病菌金黃色葡萄球菌、停乳鏈球菌、無乳鏈球菌均有較好的抑制作用；如馮淑怡等報道，連翹酯苷對綠膿桿菌、大腸桿菌、金黃色葡菌球菌致病的模型小鼠具有很好地抗感染作用。連翹酯苷中幾乎全部是連翹酯苷A在起作用。

目前現有技術對連翹酯苷A的抗病毒藥理活性研究很少。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供連翹酯苷A在制藥中的新用途，具體涉及連翹酯苷A在制備治療乙型肝炎藥物中的用途。

本發明通過連翹酯苷A體外抗乙肝病毒試驗，觀察連翹酯苷A抗乙肝病毒的藥效作用。本發明試驗方案采用的是連翹酯苷A的凍干粉針劑，但連翹酯苷A的作用也適用于口服制劑。

本發明隨后的連翹酯苷A體外抗乙肝病毒試驗結果表明：采用HepG₂2.2.15細胞模型，連翹酯苷A在體外的細胞毒性TC₅₀＝739μg/mL；對S抗原的抑制IC₅₀＝149.4μg/mL；對e抗原的抑制IC₅₀＝139.6μg/mL；對細胞HBV-DNA的抑制IC₅₀＝56.3(μg/mL)。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。這些實施例應理解為僅用于說明本發明而不用于限制本發明的保護范圍。在閱讀了本發明記載的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發明權利要求所限定的范圍。

實施例1(連翹酯苷A體外抗乙肝病毒試驗)

一、試驗目的：

觀察連翹酯苷A抗乙肝病毒的藥效作用。

二、試驗材料：

受試藥物：連翹酯苷A凍干粉針劑，由上海玉森新藥開發有限公司提供，批號：060909。

連翹酯苷A的制備方法可參見中國專利CN101081855A、CN101081856A、CN101081857A、CN1899382A或CN101209286A。

受試藥物溶于DMSO制備成20mg/mL，然后用DMEM培養液稀釋成不同的濃度。

細胞模型：乙型肝炎病毒(HBV)轉染HepG₂細胞，即HepG₂2.2.15細胞。

陽性對照藥物：恩替卡韋。

藥物毒性試驗：MTT法MTT(Aldrich)。

HBV抗原檢測：ELISA法上海實業科華生物技術有限公司試劑盒。

HBVDNA檢測：用熒光定量PCR方法檢測。

三、試驗方法(主要參考文獻：中華人民共和國衛生部藥政局.新藥臨床及臨床前研究指導原則匯編.1993)

1、藥物毒性試驗：

96孔培養板每孔加入120μl(4×10⁵cells/mL)Hep?G₂.2.2.15細胞，37℃，5％CO₂單層培養72小時，棄去上清液，加入按要求配制成5個濃度的藥液，同時設細胞對照組。每3天更換樣品液一次，共培養9天，棄去上清液，加入90μL?of?DMEM?and?10μL?of?the?5mg/mlMTT在培養箱內保持3hours.棄去上清液，加入100μl?of?DMSO，培養板在50rpm振蕩5min，在490nm處讀O.D，測定無毒濃度(TCD0)。

2、病毒抗原抑制測試：

96孔培養板每孔加入120μl(4×10⁵cells/mL)Hep?G₂.2.215細胞，37℃，5％CO₂單層培養72小時，棄去上清液，加入按要求配制成5個濃度的藥液，同時設細胞對照組和陽性藥物對照組。每3天，更換樣品液一次，共培養9天，分別取上清液用ELISA方法測定HBsAg、HBeAg，與細胞對照組比較，計算抗原抑制率(％)及IC50。

3、病毒DNA抑制測試：