[發明專利]一種免PCR擴增無需檢測儀器的核酸分析方法

有效

• 申請號: 200810207958.2
• 申請日: 2008-12-26
• 公開（公告）號: CN101760527A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 李久彤;姚見兒;白艷軍;周雪雷;張曉峰;周偉
• 申請（專利權）人: 上海透景生命科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明涉及體外檢測技術領域，具體地涉及一種免PCR擴增無需特殊檢測 儀器的核酸分析方法。

背景技術

目前常規分析方法的靈敏度還不足以直接分析檢測生物的目標核酸(DNA或 RNA)，一般均需對目標片斷進行PCR擴增，使其富集到一定濃度后才可用于檢 測。由于PCR反應具有強大的擴增效率，易造成交叉污染，極微量的污染便可 導致假陽性結果。

一直以來，科研工作者開發了一些免PCR擴增的方法用于核酸分析，這些 方法大多是放大信號而非富集目標物。如：雜交捕獲法(WO?03/078966，美國 Digene公司)，bDNA法，Monica?K等人綜合運用Luminex流式熒光技術和 Dendrimer技術直接檢測目標核酸(JOURNAL?OF?CLINICAL?MICROBIOLOGY，July 2005，p.3255-3259，Vol.43，No.7)。

此外，美國Nanosphere公司還開發了商業化的儀器和試劑，不擴增目標DNA 片斷而是擴增信號，做到了直接檢測目標核酸(www.nanosphere.us)。這些方法 均需特殊的配套儀器對產生的信號進行檢測，成本較高。

然而，在我國購置價格昂貴的儀器對于許多用戶或許多場合而言是不現實 的。另外，購置儀器后維護成本高和使用率低也成為一大問題。

因此本領域需要一種成本低廉又無需PCR擴增的核酸分析方法，便于核酸 分析技術的普及推廣。

發明內容

本發明的目的就是提供一種成本低廉又無需PCR擴增的核酸分析方法。

本發明的另一目的是提供一種可以在不使用昂貴檢測儀器或基本上無需檢 測儀器的情況下進行核酸分析的方法。

在本發明的第一方面，提供了一種攜帶檢測探針的生物素-親和素的復合 物，所述復合物包括：

(a)固相載體；

(b)根序列，所述的根序列是固定于所述固相載體表面上的寡核苷酸單鏈；

(c)引發序列，所述的引發序列是互補結合于所述根序列的、并且在一端 標記有生物素的寡核苷酸單鏈；

(d)第n級親和素，其中n為1-20的正整數；并且當n為1時，則第1級 親和素結合于所述引發序列上的生物素；

(e)生長序列，所述的生長序列是兩端標記有生物素的寡核苷酸單鏈，所 述生長序列中位于一端的生物素與第n級親和素結合，而位于另一端的生物素 與第n+1級親和素結合，其中n為1-20的正整數；和

(f)檢測探針，所述的檢測探針是一端標記有生物素的寡核苷酸單鏈，而 且所述檢測探針中的生物素與第n級親和素結合，并且所述的檢測探針包括與 目標核酸檢測區互補的檢測互補結合區以及與信號探針互補的信號互補結合 區。

在另一優選例中，所述的固相載體是微球，更佳地為磁性微球。

在另一優選例中，n為6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20。

在另一優選例中，所述的根序列的長度為20-60個堿基，更佳地為25-50 個堿基；

在另一優選例中，所述的引發序列的長度為10-50個堿基，更佳地為15-40 個堿基。

在另一優選例中，所述引發序列與根序列的互補結合區的長度為20-40bp， 更佳地為20-30bp。

在另一優選例中，所述的生長序列的長度為8-30個堿基，更佳地為10-20 個堿基。

在另一優選例中，所述的生長序列是長度為8-20個堿基的polyT。

在另一優選例中，所述的檢測探針的長度為40-80個堿基，更佳地50-70 個堿基。

在另一優選例中，所述的檢測探針中與目標核酸檢測區互補的檢測互補結 合區長度為20-30個堿基。

在另一優選例中，所述的檢測探針中與信號探針互補的信號互補結合區長 度為15-20個堿基。

在另一優選例中，所述的檢測探針中的檢測互補結合區和信號互補結合區 之間是長度為0-50個堿基(較佳地4-30個堿基，更佳地8-15個堿基)的間隔區。

在本發明的第二方面，提供了一種攜帶檢測探針的生物素-親和素的復合 物，所述復合物包括：