[發(fā)明專利]近擬鹿角靈芝種菌株或子實(shí)體特異分子標(biāo)記及獲得方法與應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810204548.2
• 申請(qǐng)日: 2008-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN101514362A
• 公開（公告）日: 2009-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐傳紅;張勁松;王晨光;蘇春麗;唐慶九;賈薇;楊焱;劉艷芳;郝瑞霞;周帥;馮娜;劉方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所
• 代理人: 黃志達(dá);謝文凱

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬靈芝菌株鑒別領(lǐng)域，特別是涉及一種近擬鹿角靈芝(Ganodermasubamboinense)種菌株或子實(shí)體特異性分子標(biāo)記及其獲得方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》記載，靈芝有益心氣、養(yǎng)心生血、助心充脈、安神、益脾益肺、強(qiáng)筋骨、利關(guān)節(jié)、治耳聾等功效。近代研究發(fā)現(xiàn)靈芝不但對(duì)人類三大死因的癌癥、腦溢血和心臟病有療效，還對(duì)胃腸、肝臟、腎臟、白血病、神經(jīng)衰弱、慢性支氣管炎、哮喘、過敏等疾病有顯著療效。此外靈芝還有強(qiáng)精、消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、解毒、利尿、凈血等多種作用和功效。近年來，國(guó)際藥學(xué)界發(fā)現(xiàn)靈芝所含有機(jī)鍺是人參的4-5倍，鍺被認(rèn)為是“長(zhǎng)壽元素”，能促進(jìn)血液循環(huán)，增強(qiáng)血紅蛋白攜氧能力，提高代謝功能、延緩衰老。因此，靈芝被譽(yù)為“健康食品之冠”(虞和澍，1994)。

周月琴等(2005)利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ganoderma?subamboinense乙醇提取物能明顯誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞產(chǎn)生凋亡。陳春鋒(2007)發(fā)現(xiàn)G..subamboinense也能顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞Raw264.7吞噬中性紅顆粒、釋放NO，促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖；菌絲體多糖提取物的免疫活性菌絲體多糖提取物與子實(shí)體多糖提取物一樣表現(xiàn)出較強(qiáng)的激活巨噬細(xì)胞免疫活性作用。

隨著對(duì)靈芝的生物學(xué)功效的不斷了解，以其為原料開發(fā)的產(chǎn)品越來越多，銷售量也越來越大，靈芝原料的質(zhì)量越來越受到重視。近年來，隨著靈芝各種產(chǎn)品的商品化，大大帶動(dòng)了中國(guó)靈芝栽培生產(chǎn)的迅速發(fā)展，同時(shí)靈芝的種質(zhì)資源也在不斷擴(kuò)大，但是由于我國(guó)食藥用菌品種登記制度尚未完善，因此靈芝的生產(chǎn)用菌種比較混亂，同種異名和異名同種的現(xiàn)象在栽培生產(chǎn)上非常普遍，這不僅給菌種的管理帶來了難度，也給以靈芝為原料的保健品及藥品等的相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。現(xiàn)在因?yàn)榫N問題常常造成我國(guó)靈芝產(chǎn)品質(zhì)量難以穩(wěn)定的局面，也嚴(yán)重地制約了我國(guó)靈芝產(chǎn)品走出國(guó)門，走向國(guó)際市場(chǎng)的步伐。

傳統(tǒng)的分類鑒定主要依據(jù)子實(shí)體的形態(tài)學(xué)特征來進(jìn)行，包括擔(dān)孢子的大小和子實(shí)體真皮菌絲的形態(tài)特征，但是子實(shí)體的許多形態(tài)學(xué)特征往往隨著生長(zhǎng)條件的不同而發(fā)生變化，而且許多鑒別性特征經(jīng)常是幾個(gè)種所共有的，這給傳統(tǒng)的分類學(xué)帶來了很大的困難，僅僅依據(jù)形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行菌種鑒定不是很可靠。因此，尋找可靠的鑒定手段，對(duì)靈芝產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展尤為重要。

近年來，國(guó)內(nèi)對(duì)栽培靈芝菌株的分類研究也越來越多，主要是集中在應(yīng)用拮抗實(shí)驗(yàn)、RAPD(Random?amplified?polymorphic?DNA，隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA)分析及同工酶分析技術(shù)方面。

張松等(1995)通過對(duì)4株靈芝菌株的酯酶同工酶酶譜的分析發(fā)現(xiàn)，供試的四個(gè)菌株存在5條相同的酶帶，說明它們具有靈芝的某些共同的遺傳特征，在其代謝過程中具有某些相似的生理活動(dòng)，但各菌株在酶帶數(shù)目、Rf值及含量百分比上存在差異，均具有自己的特征酶帶，同時(shí)發(fā)現(xiàn)子實(shí)體形態(tài)學(xué)特征相似的，酯酶同工酶酶譜也相似，親緣關(guān)系比較近，這些說酯酶同工酶分析對(duì)于靈芝的分類鑒定有一定的價(jià)值。

趙明文等(2003)利用RAPD技術(shù)對(duì)生產(chǎn)中常用的靈芝屬8個(gè)菌株的親緣關(guān)系進(jìn)行了分析。根據(jù)UPGMA構(gòu)建的樹狀圖將8個(gè)菌株在較低的相似水平上分成3個(gè)明顯不同的組：第1組包括黑芝(Ganoderma?atrum)、松杉靈芝(Ganoderma?tsugae)、圓芝(Ganodermarotundatum)、靈芝0770(Ganoderma?lucidum?0770)和韓國(guó)靈芝(Ganoderma?lucidum?HG)；第2組包括密紋靈芝(Ganoderma?crebrostriatum)和紫芝(Ganoderma?sinense)；第3組為樹舌靈芝(Ganoderma?applanatum)。這一結(jié)果與經(jīng)典分類結(jié)果基本相符，表明RAPD技術(shù)可以用來區(qū)分生產(chǎn)中一些常用的靈芝種，同時(shí)說明靈芝生產(chǎn)用種之間遺傳差異較大，可能是造成靈芝產(chǎn)品研究比較混亂的重要原因。

1999年我國(guó)簽署了《國(guó)際植物新品種保護(hù)法》，這不僅要求我們尊重其它國(guó)家的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，同時(shí)也要加強(qiáng)保護(hù)我們國(guó)家自己的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，為了建立食用菌新品種登記制度來真正保護(hù)我國(guó)的品種產(chǎn)權(quán)，必須首先建立成熟的品種鑒定技術(shù)，為新品種登記奠定基礎(chǔ)。