[發(fā)明專利]一種定向誘導(dǎo)軟骨細胞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810203814.X
• 申請日: 2008-11-28
• 公開（公告）號: CN101748095A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周軍杰;彭文;李琦;殷佩浩
• 申請（專利權(quán)）人: 上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域。涉及一種定向誘導(dǎo)軟骨細胞的方法，具體涉及一種采用人類羊膜上皮細胞定向誘導(dǎo)軟骨細胞的方法。?

背景技術(shù)

研究報道，關(guān)節(jié)外傷和退行性改變等引起的軟骨損傷可導(dǎo)致關(guān)節(jié)長期的疼痛和功能障礙，甚至關(guān)節(jié)廢用，給患者生活帶來極大的痛苦和不便。關(guān)節(jié)軟骨無血液供應(yīng)和神經(jīng)支配，損傷后幾乎不能自發(fā)修復(fù)，在某些情況下可發(fā)生自發(fā)性修復(fù)反應(yīng)，但新生的組織是纖維軟骨組織，與正常的透明軟骨在組織結(jié)構(gòu)和生物化學方面有很大的不同，并且在生理負荷下會發(fā)生退行性改變，最終發(fā)展成骨性關(guān)節(jié)炎。傳統(tǒng)的治療方法，如微骨折、軟骨下鉆孔、軟骨以及軟骨膜移植等，只能暫時的緩解疼痛等癥狀，均不能成功完成透明軟骨的修復(fù)，其中的軟骨下鉆孔亦僅適用于軟骨損傷面小的病例；自體軟骨組織、軟骨膜移植，需要二次手術(shù)，并且可引起取材部位損傷；人工全關(guān)節(jié)假體置換花費高、并發(fā)癥多，并且不適合年輕患者。隨著生命科學和工程學的發(fā)展，有研究利用工程學方法和手段構(gòu)建和再生各種組織和器官替代病損組織，并取得了顯著的成就，為軟骨疾病的治療開辟新的途徑。構(gòu)建生物特性與正常關(guān)節(jié)軟骨相似的組織工程軟骨成為目前組織工程研究的熱點之一。?

現(xiàn)有技術(shù)公開了有關(guān)軟骨組織工程3要素：一定數(shù)量的種子細胞、合適的支架材料和體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化。組織工程化關(guān)節(jié)軟骨在很大程度上依賴于種子細胞的選擇。目前研究用于組織工程軟骨的種子細胞有軟骨細胞、胚胎源性細胞、間充質(zhì)干細胞、骨膜細胞、滑膜細胞等。?

據(jù)國外研究證實胚胎源性細胞(胚胎干細胞)比成體系統(tǒng)的軟骨細胞有更強的增殖能力，并且沒有引起明顯的異體排斥反應(yīng)，以其作為種子細胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損獲得良好的效果，修復(fù)組織也未見明顯退變，但其來源及其伴隨的倫理問題是限制其應(yīng)用的最大問題。人羊膜上皮細胞(human?amniotic?epithelial?cells，HAECs)來源于正常剖?宮產(chǎn)后廢棄的胎膜，不破壞正常胚胎，無需在胚胎早期終止胚胎發(fā)育，不存在引起醫(yī)學倫理爭議，同時人羊膜上皮細胞具有前期胚胎干細胞的多向分化潛能，羊膜上皮細胞也很少表達HLA-A、B、C或DR等抗原，移植后不易產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，有希望成為構(gòu)建軟骨組織工程的種子細胞源。與本方法相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)及軟骨組織工程的實驗原理有如下參考文獻：?

1?Kawaguchi?J，Mee?PJ，Smith?AG.Osteogenic?and?chondrogenic?differentiation?of?embryonic?stemcells?in?response?to?specific?growth?factors.Bone.2005，36(5)：758-769?

2?Gan?L，Kandel?RA.In?vitro?cartilage?tissue?formation?by?Co-culture?of?primary?and?passagedchondrocytes.Tissue?Eng.2007，13(4)：831-842?

3?Afizah?H，Yang?Z，Hui?JH.A?comparison?between?the?chondrogenic?potential?of?human?bone?marrowstem?cells(BMSCs)and?adipose-derived?stem?cells(ADSCs)taken?from?the?same?donors.Tissue?Eng.2007，13(4)：659-666?

4?Sudo?K，Kanno?M，Miharada?K.Mesenchymal?progenitors?able?to?differentiate?into?osteogenic，chondrogenic，and/or?adipogenic?cells?in?vitro?are?present?in?most?primary?fibroblast-like?cellpopulations.Stem?Cells.2007，25(7)：1610-1617?

5?Nakamura?Y，Wang?X，Xu?C.Xenotransplantation?of?long-term-cultured?swine?bone?marrow-derivedmesenchymal?stem?cells.Stem?Cells.2007，25(3)：612-620?