[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)沙丁胺醇的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810203436.5
• 申請(qǐng)日: 2008-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101413953A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳峰;梁曉翠;盧慶鋆;徐曉嬰;盧永紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 上海交達(dá)專(zhuān)利事務(wù)所
• 代理人: 毛翠瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)沙丁胺醇的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品中如動(dòng)物組織、內(nèi)臟、血液、尿液和飼料、飼料原料中的沙丁胺醇含量或殘留量。屬于免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)屬于β-興奮劑。β-興奮劑是營(yíng)養(yǎng)重分配劑的一種，是一類(lèi)結(jié)構(gòu)和功能類(lèi)似腎上腺素和去甲腎上腺素的苯乙醇胺類(lèi)衍生物，它能改善脂肪型動(dòng)物的肉與脂肪的比例，降低酮體脂肪含量，提高瘦肉率，并能加速動(dòng)物生長(zhǎng)，而被添加于動(dòng)物飼料中。常見(jiàn)的β2-興奮劑有克倫特羅、萊克多巴胺及沙丁胺醇等。隨著我國(guó)對(duì)克倫特羅(俗稱(chēng)＂瘦肉精＂)監(jiān)管力度的加大，克倫特羅的使用逐漸減少，其他β2-興奮劑的使用逐漸增加。由于沙丁胺醇有類(lèi)似于克倫特羅的作用，在動(dòng)物組織中殘留，從而對(duì)人體產(chǎn)生不利影響，所以我國(guó)禁止沙丁胺醇其作為飼料添加劑使用。

在沙丁胺醇的檢測(cè)方法方面，目前最為常用的方法包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、毛細(xì)管電泳、酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)等方法。

1、高效液相色譜(HPLC)用于沙丁胺醇的檢測(cè)：

HPLC法具有檢測(cè)精確度高、假陽(yáng)性率低的特點(diǎn)。HPLC法的主要缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴、操作比較繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)費(fèi)用昂貴；且前期樣品的萃取條件的選擇也對(duì)檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性有較大影響。

2、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)用于沙丁胺醇的檢測(cè)：

GC-MS靈敏度很高，假陽(yáng)性率低。該方法的主要缺點(diǎn)是樣品需要衍生化這樣復(fù)雜的前期處理。雖然經(jīng)過(guò)衍生化處理的樣品能在質(zhì)譜中給出更多的結(jié)構(gòu)信息，但是衍生化會(huì)產(chǎn)生多個(gè)不同的產(chǎn)物并導(dǎo)致樣品的部分丟失，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。

3、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)用于沙丁胺醇的檢測(cè)：

LC-MS對(duì)樣品不需要衍生化處理，可對(duì)尿液、血液、肝臟、毛發(fā)和眼球樣品進(jìn)行檢測(cè)。LC如果與兩個(gè)串聯(lián)MS聯(lián)用，可進(jìn)一步提高信噪比。LC-MS的缺點(diǎn)與GC-MS一樣，操作步驟繁瑣，需要貴重儀器，所以一般用作對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的確認(rèn)手段。

4、毛細(xì)管電泳用于沙丁胺醇的檢測(cè)：

毛細(xì)管區(qū)帶電泳法分離效率可達(dá)幾百萬(wàn)理論塔板數(shù)，操作快速簡(jiǎn)便，所需樣品量少。但是該方法所需儀器昂貴，且可檢測(cè)出沙丁胺醇的最低殘留量達(dá)不到其它方法的靈敏度。

5、酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)用于沙丁胺醇的檢測(cè)：

酶聯(lián)免疫吸附分析法是當(dāng)前應(yīng)用最廣、發(fā)展最快的免疫酶技術(shù)之一，主要優(yōu)點(diǎn)在于檢測(cè)迅速，樣品前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)系統(tǒng)操作簡(jiǎn)單，成本低，同時(shí)便于進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)。其基本原理是，將抗原(或抗體)吸附在固相載體上，酶標(biāo)記抗體(或抗原)與相應(yīng)的抗原(或抗體)反應(yīng)，結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)，可以催化底物水解、氧化或還原并產(chǎn)生有色物質(zhì)，顏色的深淺與相應(yīng)的抗體(或抗原)量成正比，故可以借助成色反應(yīng)的程度來(lái)定性或定量抗體(或抗原)。ELISA檢測(cè)方法主要包括雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法等。雙抗體夾心法主要適用于分子量較大的完全抗原，而競(jìng)爭(zhēng)法則適用于抗原決定位點(diǎn)較少的小分子量半抗原。由于沙丁胺醇是小分子化合物(相對(duì)分子質(zhì)量小于5000)，屬于半抗原，因此常用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法來(lái)測(cè)定。

6、化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)的工作原理與特點(diǎn)

化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)不同于酶聯(lián)免疫吸附分析法，它是化學(xué)發(fā)光法和免疫分析法結(jié)合的產(chǎn)物，因此同時(shí)具有化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)的高靈敏性和免疫分析技術(shù)的高特異性。

化學(xué)發(fā)光免疫分析法的基本原理與ELISA相似，不同之處在于酶標(biāo)記物的反應(yīng)體系是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。HRP(辣根過(guò)氧化物酶)和魯米諾或其衍生物體系就是常用的反應(yīng)體系之一，在該發(fā)光體系中加入增強(qiáng)劑可增加化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，并在較長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定，從而大大提高免疫分析的靈敏度。如我國(guó)胥傳來(lái)等(胥傳來(lái)等，分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào)，2005，33(5)：699-702)建立的間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)豬尿樣中克倫特羅，實(shí)際檢測(cè)范圍為0.04～25.8μg/kg。胥傳來(lái)等人所用方法的缺點(diǎn)是需要同時(shí)使用一抗和二抗(其中二抗為酶標(biāo)記抗體)，兩種抗體加入后都需要進(jìn)行溫育反應(yīng)，延長(zhǎng)了檢測(cè)時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測(cè)沙丁胺醇的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢測(cè)成本低、重復(fù)性好、高通量等優(yōu)點(diǎn)，可用于動(dòng)物尿液、血樣、組織、內(nèi)臟和飼料、飼料原料等樣品中沙丁胺醇的殘留量檢測(cè)。