[發(fā)明專利]一種兒童白血病基因檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810200586.0
• 申請日: 2008-09-26
• 公開（公告）號: CN101684492A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 穆海東;汪寧梅;黎颯
• 申請（專利權(quán)）人: 上海裕隆生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疾病易感基因檢測技術(shù)，具體的說，涉及一種有關(guān)兒童白血病基因檢測的試劑盒。

背景技術(shù)

白血病為小兒常見的血液系統(tǒng)的惡性腫瘤。是一種由于造血干細(xì)胞增殖分化異常而引起的惡性增殖性疾病，它不僅影響骨髓及整個造血系統(tǒng)，并浸入身體其他器官。據(jù)統(tǒng)計(jì)，15歲以下兒童白血病的發(fā)病率為3/10萬～4/10萬。小兒白血病居小兒各種惡性腫瘤的首位，任何年齡都可發(fā)病，其中以學(xué)齡前期和學(xué)齡期兒童多見。根據(jù)發(fā)病的急緩、臨床、血液及骨髓表現(xiàn)等，一般分為急性與慢性。其中，以急性白血病為主，占小兒白血病總數(shù)的97％。急性白血病又可分為急性淋巴細(xì)胞白血病及急性非淋巴細(xì)胞白血病。前者占70-85％。

白血病的臨床表現(xiàn)是由正常血細(xì)胞減少和白血病細(xì)胞浸潤某些器官和組織所引起的。病人常常因發(fā)燒、臉色發(fā)白、虛汗、皮膚紫斑和疼痛等癥狀去看病。發(fā)病可能很隱蔽，也可能很突然，癥狀可輕可重。大多數(shù)在確診之前有數(shù)天病史，少數(shù)可達(dá)數(shù)周至數(shù)月。極個別的病例表現(xiàn)為爆發(fā)性的高熱、虛弱、貧血、不定位的或定位的疼痛及大片淤斑，進(jìn)展極快。

當(dāng)家庭中有一個成員發(fā)生白血病時，其近親發(fā)生白血病的機(jī)率會比一般人高4倍。單卵雙胞胎中如果一個患急性白血病，另一個發(fā)生率為20％～25％。以上事實(shí)均提示白血病的病因可能與遺傳有關(guān)。近年研究證實(shí)，染色體數(shù)量的增加或減少等數(shù)目異常，以及易位、倒置、缺失等結(jié)構(gòu)異常，使基因的結(jié)構(gòu)、表達(dá)異常。基因表達(dá)或基因的失活是細(xì)胞惡變的基礎(chǔ)之一。

兒童白血病具有兩個特點(diǎn)：一是惡性程度高，病情發(fā)展迅速、大多是急性；二是對化學(xué)藥物治療很敏感，癌細(xì)胞容易殺滅。一般1到5歲的孩子最容易得的是急性淋巴細(xì)胞白血病，這一年齡段患者經(jīng)治療后效果最好。一般在9歲以前都能較好治愈，而14歲以后就和成人一樣較難治愈。因此，幼兒期的白血病如能及時發(fā)現(xiàn)，采用適當(dāng)?shù)闹委熓侄危寄苋〉脻M意療效。

人們希望有一種簡便而客觀的方法可以進(jìn)行兒童白血病基因檢測，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷，提早采取預(yù)防措施，盡量避免悲劇的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容

為了可以簡便而客觀地對兒童白血病進(jìn)行測試，本發(fā)明提供一種兒童白血病基因檢測試劑盒，可以以兒童DNA樣本為測試樣本，對兒童白血病的基因進(jìn)行檢測，從而為預(yù)防兒童白血病，提供重要的參考信息。

該試劑盒由DNA抽提試劑，預(yù)混PCR反應(yīng)液，標(biāo)準(zhǔn)陽性對照品，標(biāo)準(zhǔn)陰性對照品組成。使用時以被測兒童的DNA樣本為檢測對象，經(jīng)過樣本DNA抽提后，使用試劑盒在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)合反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行診斷。

所述的預(yù)混PCR反應(yīng)液含有SYBR?green?I，以及兒童白血病相關(guān)的GSTP1和XRCC1基因突變位點(diǎn)的擴(kuò)增引物；擴(kuò)增引物為包含突變位點(diǎn)的上游引物和正常的下游引物，序列分別如下：

擴(kuò)增GSTP1基因的引物序列如下：

上游引物F1A(C)?5-GAC?CTC?CGC?TGC?AAA?TCC?A-3??19bp，

上游引物F1G(C)?5-AC?CTC?CGC?TGC?AAA?TCC?G-3???18bp，

下游引物R1?????5-GCA?CTG?GGG?GCT?GAA?CAAA-3???19bp；

擴(kuò)增XRCC1基因的引物序列如下：

上游引物F2A(C)?5-GCA?CAC?TCC?GGA?ATG?GCGA-3??19bp，

上游引物F2G(C)?5-GCA?CAC?TCC?GGA?ATG?GCG?G-3?19bp，

下游引物R2?????5-CCT?CCG?GCG?TAG?CAC?GCA-3???18bp。

上述的兒童白血病基因檢測試劑盒，所述的陽性對照品有4個，分別包含如下的序列：

SEQ1：

GGACCAGCAG?GAGGCAGCCC?TGGTGGACAT?GGTGAATGAC

GGCGTGGAGG?ACCTCCGCTG?CAAATACATC?TCCCTCATCT

ACACCAACTA?TGTGAGCATC?TGCACCAGGG?TTGGGCACTG

GGGGCTGAAC?AAAGAAAGGG?GCTTCTTGTG?CCCTCACCCC

CCTTACCCCT?CAGGTGGCTT?GGGCTGACCC?CTTCTTGGG；

SEQ2：

GGACCAGCAG?GAGGCAGCCC?TGGTGGACAT?GGTGAATGAC