[發(fā)明專利]用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810200027.X
• 申請日: 2008-09-18
• 公開（公告）號: CN101676725A
• 公開（公告）日: 2010-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛海鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海泰金芯生物分子檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種免疫層析試紙，具體來說是一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙及其制備方法。

背景技術(shù)：

鼠疫的致病菌鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia?pestis)是人們早已熟知的烈性病原微生物，具有容易獲得，致病性強(qiáng)，致死率高，對自然環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)的特點，不同性別和年齡的人都是易感人群，因而被公認(rèn)為是經(jīng)典的生物戰(zhàn)劑。“9.11”事件以后，美國國家反恐預(yù)案將鼠疫耶爾森氏菌列為生物恐怖紅色警報(最高級)中的烈性病原微生物，對環(huán)境中鼠疫耶爾森氏菌的快速檢測現(xiàn)已成為反生物恐怖的重要內(nèi)容。

鼠疫耶爾森氏菌經(jīng)典的檢測程序一般分為四步，包括顯微鏡涂片檢查、細(xì)菌培養(yǎng)、鼠疫噬菌體裂解實驗和動物實驗。涂片檢查和細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本一般是采集疑似病人或動物的淋巴結(jié)吸出物、痰、腦脊液或死者的肺部組織材料。鼠疫耶爾森氏菌是桿狀、不形成芽孢、革蘭氏呈陰性且兩端濃染的厭氧菌。腺鼠疫中80％以上的血液標(biāo)本培養(yǎng)為陽性，初代培養(yǎng)需要觀察3-5天。噬菌體裂解實驗用于細(xì)菌鑒定，動物實驗用于污染材料中病原的分離及毒力的測定。將被檢材料制成懸液，通過腹腔、皮下和經(jīng)皮等途徑接種0.2-0.5mL于小白鼠或豚鼠，材料中若果有一定數(shù)量的鼠疫耶爾森氏菌，動物一般在接種2天后死亡。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙及其制備方法，所述的這種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙要解決現(xiàn)有技術(shù)中的檢測鼠疫耶爾森氏菌的方法靈敏度低，檢測方法復(fù)雜，時間長的技術(shù)問題。

本發(fā)明一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙，包括一個纖維膜，所述的纖維膜上設(shè)置有測試帶和對照帶，所述的測試帶中噴涂有鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體溶液，所述的對照帶上噴涂有抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的抗抗體，在所述的纖維膜上靠近對照帶的一側(cè)設(shè)置有吸水墊，在所述的纖維膜上靠近測試帶的一側(cè)設(shè)置有金標(biāo)墊，所述的金標(biāo)墊為玻璃纖維膜、樹脂或無紡布，所述的金標(biāo)墊中設(shè)置有抗耶爾森氏菌F1抗原抗體的免疫膠體金探針溶液，所述的金標(biāo)墊上設(shè)置有樣品墊，所述的樣品墊設(shè)置在遠(yuǎn)離測試帶的金標(biāo)墊的一側(cè)。

進(jìn)一步的，所述的纖維膜的另外一側(cè)設(shè)置有背板。

本發(fā)明還提供了一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙的制備方法，包括員一個制備鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體和抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的抗抗體的過程，將鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體溶液噴到纖維膜上形成測試帶，將抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的抗抗體噴到所述纖維膜的另一區(qū)域形成對照帶，然后將吸水紙墊粘貼在所述纖維膜的遠(yuǎn)離所述測試帶的一端；包括一個制備抗耶爾森氏菌F1抗原抗體的免疫膠體金探針溶液的過程，將玻璃纖維膜、樹脂或無紡布進(jìn)入該免疫膠體金探針溶液，得到金標(biāo)墊，將其粘貼在纖維素膜的靠近所述測試帶的一端，然后在金標(biāo)墊的遠(yuǎn)離所述測試帶的一端粘貼樣品墊，得到檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙。

進(jìn)一步的，所述測試帶上抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的濃度為2.0-2.26mg/mL。

進(jìn)一步的，所述對照帶上抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的濃度為2.5-3.0mg/mL。

進(jìn)一步的，所述鼠疫耶爾森氏菌F1抗原抗體的免疫膠體金探針的制備方法如下：

3)將0.01％HAuCl4水溶液，加熱煮沸，每100mLHAuCl4溶液進(jìn)行如下操作：攪動下加入1.6mL的1％檸檬酸三鈉水溶液，直到液體顏色穩(wěn)定成葡萄酒紅色，得到膠體金溶液；

4)配制含有濃度為28μg/mL的抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原的抗體的免疫膠體金探針溶液。

本發(fā)明還提供了一種試劑盒，所述的試劑盒中設(shè)置有上述的用于檢測鼠疫耶爾森氏菌的免疫層析試紙。

在實際應(yīng)用中，所述纖維素膜為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜，寬度控制在20-2.5mm為宜；所述金標(biāo)墊寬度為5-10mm；所述樣品墊為玻璃纖維膜，寬度為20-40mm。

本發(fā)明的免疫層析試紙可達(dá)到與反向血凝實驗同樣的特異性和敏感性，并且更加簡便快速，是檢測鼠疫流行及早期檢測的有效方法。

本發(fā)明與其他檢測鼠疫耶爾森氏菌的方法相比，優(yōu)勢在于：檢測過程中標(biāo)本處理簡單，不需要專門儀器和人員培訓(xùn)，非專業(yè)技術(shù)人員按照說明書即可操作，并可迅速觀察結(jié)果，具有簡便性、敏感性、特異性和快速性的優(yōu)點，適于臨床和現(xiàn)場使用。

具體實施方式：

實施例1制備抗鼠疫耶爾森氏菌F1抗原的抗體