[發(fā)明專利]一種用于檢測鼠疫細(xì)菌感染的免疫層析試紙及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810200024.6
• 申請日: 2008-09-18
• 公開（公告）號: CN101676723A
• 公開（公告）日: 2010-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛海鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 上海海泰金芯生物分子檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種免疫層析試紙，具體來說是一種用于檢測鼠疫細(xì)菌感染的免疫層析試紙及其制備方法。

背景技術(shù)：

鼠疫耶爾森氏菌病的實驗室診斷主要為病原學(xué)診斷和血清抗體檢測，病原學(xué)診斷方法是采集疑似鼠疫耶爾森氏菌病患者或病畜皮膚或腺體潰瘍病灶分泌物、膿、血、痰樣品，接種胰酶大豆血瓊脂培養(yǎng)基，37℃5％CO2培養(yǎng)72小時，挑取灰白色、圓形的菌落，制備玻片并作革蘭氏染色，如為革蘭氏陰性球桿菌，則繼續(xù)進(jìn)行生化鑒定和血清學(xué)試驗，必要時需進(jìn)行動物獨立測定。血清抗體檢測的原理為：人、家畜和野生動物感染鼠疫耶爾森氏菌后均可出現(xiàn)有診斷意義的血清抗體，初次特異抗體的出現(xiàn)一般是在感染后1周，4-6周抗體滴度可達(dá)最高，以后逐步下降，半年至一年后仍能檢測出特異性抗體。

鼠疫感染一周左右會出現(xiàn)特異性抗體，此時可用血清學(xué)檢查進(jìn)行疾病診斷。鼠疫血清學(xué)診斷方法有：細(xì)菌凝集反應(yīng)、沉降反應(yīng)、碳凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)、免疫熒光反應(yīng)、放射免疫沉淀反應(yīng)、免疫電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗和紅細(xì)胞凝集試驗(簡稱血凝)，目前應(yīng)用最廣的是血凝。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙及其制備方法，所述的這種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙及其制備方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中的用于檢測鼠疫感染的方法測試時間長，測試方法復(fù)雜的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙，包括一層硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上設(shè)置有一條檢測線和質(zhì)控線，所述的檢測線為鼠疫耶爾森氏菌多糖抗原，所述的質(zhì)控線為能與金黃色葡萄球菌蛋白A結(jié)合的抗體，所述的硝酸纖維素膜設(shè)置在一層吸水墊上，所述的硝酸纖維素膜上設(shè)置有一層金標(biāo)墊，所述的金標(biāo)墊為玻璃纖維膜或聚酯膜，所述的玻璃纖維膜或聚酯膜中設(shè)置有金黃色葡萄球菌蛋白A標(biāo)記膠體金探針溶液，所述的金標(biāo)墊上設(shè)置有一層樣品墊。

本發(fā)明還提供了一種用于檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙的制備方法，包括一個鼠疫耶爾森氏菌多糖抗原的制備方法，一個將鼠疫耶爾森氏菌多糖抗原以及可與金黃色葡萄球菌蛋白A結(jié)合的抗體固化在硝酸纖維素膜上形成檢測線和質(zhì)控線的步驟，一個將硝酸纖維素膜粘貼在吸水紙墊上的步驟，一個制備金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)標(biāo)記膠體金探針的步驟，一個制備金標(biāo)墊的步驟，一個在金標(biāo)墊上粘貼樣品墊的步驟，得到用于檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙。

本發(fā)明和已有技術(shù)相對比，其效果是積極和明顯的。本發(fā)明的檢測鼠疫耶爾森氏菌感染的免疫層析試紙及其制備方法與現(xiàn)有的其他方法相比，特異性強、更簡便、更快速，更適于臨床和特殊情況下現(xiàn)場使用。

具體實施方式：

實施例1檢測鼠疫感染的免疫試紙的制備

1.材料

氯金酸(HAuCl₄.4H₂O)，分析純，上海試劑一廠

檸檬酸三鈉(Na₃C₅H₅O₇.2H₂O)，分析純，北京化工廠

碳酸鉀(K₂CO₃)分析純，北京化工廠

金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)，購于Amersham?Pharmacia?Biotech公司鼠疫耶爾森氏菌株(從俄羅斯引進(jìn)，株名為E.V，現(xiàn)由中國人名解放軍微生物流行病研究所菌種庫保存，保藏號410049)

鼠疫陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品，國家生物制品鑒定所生產(chǎn)豚鼠、黃鼠、兔和人鼠疫陽性和陰性血清，中國疾病預(yù)防控制中心鼠疫布氏桿菌預(yù)防控制基地提供。

硝酸纖維膜，美國Millipore公司。

玻璃纖維膜，上海良信公司。

塑料背板，北京燕華公司。

間接血凝鼠疫測定藥盒，中國疾病預(yù)防控制中心鼠疫布氏桿菌病預(yù)防控制基地生產(chǎn)(Lot?No.200301)。

2.1鼠疫耶爾森氏菌可溶性蛋白多糖復(fù)合物抗原的制備

將鼠疫桿菌接種4％甘油普通培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48小時，用無菌生理鹽水洗下菌苔，菌懸液約為比濁濃度(1X10⁸個菌/ml)，流通蒸汽1h，冷卻至室溫后8000r/min離心15min，收集上清備用。

2.2金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)膠體金探針的制備：