[發明專利]一種測定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測方法

有效

• 申請號: 200810198628.1
• 申請日: 2008-09-19
• 公開（公告）號: CN101368903A
• 公開（公告）日: 2009-02-18
• 發明（設計）人: 舒緒剛;李大光;林娜妹;黃慧民;滕冰;許祥
• 申請（專利權）人: 廣州天科生物科技有限公司;廣東工業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/483
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司
• 代理人: 宋冬濤

技術領域

本發明涉及甘氨酸銅、鋅、鐵等氨基酸微量元素螯合物的螯合率的檢測領 域，具體為一種測定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測方法。

背景技術

氨基酸微量元素螯合物符合人體微量元素吸收的機制和特點，把人體必需 的氨基酸和微量元素有機地結合起來，成為一種新型高效的微量元素營養強化 劑，具有良好的理化性質和生物活性。甘氨酸是分子量最小的氨基酸，其與微 量元素反應生成的螯合物也是分子量最小的氨基酸微量元素螯合物，能更好的 被肌體吸收、利用。

氨基酸微量元素螯合物是由1個或多個氨基酸基團與金屬離子發生配合反 應形成的具有環狀結構的化合物。它具有穩定性好、吸收率高、生物效價高、 毒性小等優點，目前已經廣泛地用于畜牧生產中。氨基酸微量元素螯合物螯合率 的高低是反映氨基酸微量元素螯合物品質的一個重要指標，目前對氨基酸微量 元素螯合物螯合率的測定方法主要有凝膠過濾色譜法和滴定法。

凝膠過濾色譜法可以按分子大小將不同形態微量元素分開，為研究氨基酸 微量元素螯合物的存在狀態提供了一種重要的檢測手段(Brown和Zeringue， Laboratory?evaluations?of?solubility?and?structural?integrity?of?complexd?and?chelated trace?miner?al?supplements，，1994；Matsui等，Supplementation?of?zinc?as?amino acid-chelated?zinc?for?piglets，1996)。Cao(1998，2000)利用凝膠色譜柱檢測 緩沖液中游離態和絡合態鋅，結果表明在pH值為2和5的緩沖液中，有機鋅 產品的洗脫峰與硫酸鋅中鋅離子的洗脫峰相同，而對于有機鋅產品的中性水溶 液，在離子態鋅的洗脫峰之前還出現一個較小的洗脫峰，說明此條件下小部分 鋅為絡合態。林萍(2004)用Sephadex?G-10凝膠色譜對合成的甘氨酸螯合鐵 的組成進行了初步分析結果發現：游離的氨基酸用硼酸洗脫液洗脫7min就出 峰，而甘氨酸螯合鐵樣品用硼酸洗脫液洗脫60min仍無吸收峰，由此說明，在 甘氨酸螯合鐵中沒有游離的甘氨酸存在，螯合鐵在溶液中可能是以陰離子的形 式存在，和葡聚糖凝膠之間存在靜電作用。由于甘氨酸螯合鐵和游離的無機鐵 在凝膠色譜中都不能直接洗出，因此不能用凝膠色譜方法分離。管海躍(2007) 采用凝膠色譜測定甘氨酸鐵和甘氨酸鋅的螯合率，但過程相當麻煩。因此，凝 膠色譜法測定螯合率過程麻煩，在基層推廣有一定的困難。

根據氨基酸微量元素螯合物在乙醇等有機物中的溶解度極小，而微量的游 離金屬離子和氨基酸都能溶于有機溶劑的特性，利用二者在有機溶劑中的溶解 度差異，采用有機溶劑處理的辦法來純化微量元素氨基酸螯合物樣品，然后采用 滴定法可以測定氨基酸微量元素螯合物的螯合率。易凱等(2007)采用此方法 測定了蛋氨酸鋅、蛋氨酸銅、蛋氨酸鐵、甘氨酸銅、甘氨酸鐵等的螯合率。但 是，對于含有難溶于乙醇的陰離子的氨基酸微量元素螯合物樣品，滴定法不能 用于測定螯合率，故滴定法也存在一定的缺陷。

目前，市場上所銷售的氨基酸微量元素螯合物產品比較多，因為檢測螯合 率的方法不健全，所以大多數都是測定氨基酸微量元素螯合物產品中金屬的總 含量，未考慮金屬離子是結合還是游離狀態，市場情況比較混亂，許多產品做 為氨基酸微量元素螯合物銷售，但其實質只不過是微量元素和氨基酸的混合物。 為了推動氨基酸微量元素螯合物產品質量檢驗的深入研究，建立氨基酸微量元 素產品的相關標準，用以規范飼用氨基酸微量元素螯合物產品的生產、銷售和 使用是當前非常有必要的。

發明內容

本發明的目的是針對現有氨基酸微量元素螯合物螯合率檢測方法的不足，提 供一種測定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測方法，使檢測過程不需純化， 操作簡便、易于基層推廣、節約了工業生產成本。

本發明是這樣實現的：一種測定氨基酸微量元素螯合物螯合率的檢測方法， 測定步驟如下：取待測相應的氨基酸微量元素螯合物配成溶液，測其紫外—可 見吸收光譜圖；取氨基酸微量元素螯合物中相應的金屬離子的金屬化合物配成 溶液，測其紫外—可見吸收光譜圖，在紫外—可見吸收光譜圖上找目標波長λ； 取上述氨基酸微量元素螯合物溶液稀釋后在目標波長λ下測定該氨基酸微量元 素螯合物的標準曲線；稱取待測氨基酸微量元素螯合物樣品配制成溶液，在目 標波長λ下測定吸光度，然后通過計算出相應的濃度從而求出螯合率。