[發(fā)明專利]用于寡核苷酸微陣列的定量方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 200810191200.4
• 申請日: 2008-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN101586156A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: Z·H·孫;W·王;Y·鄭;H·廖
• 申請（專利權(quán)）人: 霍尼韋爾國際公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉 玥;黃可峻

1.用于分析靶核酸的定量方法，其包括：

將一種或多種熒光標(biāo)記的靶擴(kuò)增子退火至兩種或多種靶核酸探針；

將一種或多種熒光標(biāo)記的內(nèi)部對照擴(kuò)增子退火至一種或多種內(nèi)部核酸對照 探針；

激活來自雜交至兩種或多種靶核酸探針的一種或多種熒光標(biāo)記的靶擴(kuò)增子 的第一熒光應(yīng)答；

激活來自雜交至一種或多種內(nèi)部核酸對照探針的一種或多種熒光標(biāo)記的內(nèi) 部對照擴(kuò)增子的第二熒光應(yīng)答；

檢測第一和第二熒光應(yīng)答，用于定量分析一種或多種靶核酸和一種或多種 內(nèi)部核酸對照，

其中兩種或多種靶核酸探針和一種或多種內(nèi)部核酸對照探針非常接近基質(zhì) 的上表面，以及其中通過應(yīng)用預(yù)先確定波長的衰逝波激活第一和第二熒光應(yīng)答。

2.權(quán)利要求1的定量方法，其中退火發(fā)生在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)期間。

3.權(quán)利要求2的定量方法，其中第一和第二熒光應(yīng)答的檢測發(fā)生在聚合 酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的退火步驟或延伸步驟期間。

4.權(quán)利要求1的定量方法，其中應(yīng)用微陣列印刷機(jī)將兩種或多種靶核酸 探針和一種或多種內(nèi)部核酸對照探針印在并固定在基質(zhì)的表面。

5.權(quán)利要求4的定量方法，其中用選自硅烷、抗生物素蛋白、聚-L-賴氨 酸、抗生蛋白鏈菌素、多糖、硫醇或其組合的試劑化學(xué)修飾基質(zhì)。

6.權(quán)利要求1的定量方法，其中聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

7.權(quán)利要求1的定量方法，其中一種或多種內(nèi)部核酸對照是線性雙鏈脫 氧核糖核酸、環(huán)狀雙鏈脫氧核糖核酸或其組合。

8.權(quán)利要求1的定量方法，其中一種或多種內(nèi)部核酸對照具有與兩個(gè)或 多個(gè)靶核酸相同的引物結(jié)合區(qū)域。

9.權(quán)利要求1的定量方法，其中退火至一種或多種內(nèi)部核酸對照探針的 熒光標(biāo)記的擴(kuò)增子的序列長度是退火至兩種或多種靶核酸的熒光標(biāo)記的擴(kuò)增子 序列長度的約百分之五百以下。

10.權(quán)利要求1的定量方法，其中一種或多種內(nèi)部核酸對照序列具有約百 分之五以下的交叉反應(yīng)。

11.權(quán)利要求1的定量方法，其中如果存在兩種或多種內(nèi)部核酸對照，兩 種或多種內(nèi)部核酸對照以不同的濃度存在。

12.權(quán)利要求1的定量方法，其中如果存在兩種或多種內(nèi)部核酸對照探針， 兩種或多種內(nèi)部核酸對照探針以與兩種或多種靶核酸探針相同的濃度存在。

13.權(quán)利要求1的定量方法，其中一種或多種內(nèi)部核酸對照具有約百分之 五以下的與兩種或多種靶核酸的交叉反應(yīng)。

14.權(quán)利要求1的定量方法，其中在達(dá)到雜交平頂之前檢測第一和第二熒 光應(yīng)答。

15.權(quán)利要求1的定量方法，其中兩種或多種靶核酸衍生自一種或多種病 原體，其中一種或多種病原體是病毒、細(xì)菌、古細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、支原 體、朊病毒、寄生生物或其組合。

16.權(quán)利要求15的定量方法，其中一種或多種病原體是立克次氏體 (Rickellsia)、衣原體(Chlamydia)、枝原體(Mycoplasma)、螺旋體(Spirochete)、鏈 球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、單核細(xì)胞增多性李司忒菌(L. monocytogenes)、腦膜炎奈瑟氏菌(N.meningitides)、大腸桿菌(E.coli)、流感嗜血 桿菌(H.influenzae)、伯氏疏螺旋體(B.burgdorferi)、鉤端螺旋體(Leptospira)、變 形桿菌(Proteus)、厭氧桿菌(Anaerobacter)、沙門氏菌(Salmonella)、結(jié)核分支桿 菌(M.tuberculosis)、腸球菌(Enterococcus)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus)、腸病 毒(Enterovirus)、柯薩基病毒(Coxsackievirus)、HSV-1、HSV-2或其組合。