[發明專利]一種9-蒽酮螺環內酯類化合物及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 200810180617.0
• 申請日: 2008-11-18
• 公開（公告）號: CN101735193A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發明（設計）人: 顧謙群;杜林;朱天驕
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07D311/96
• 分類號: C07D311/96;A61K31/366;A61P35/00;C12P17/06;C12R1/66
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• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及用灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus?glaucus?HB1-19)(保藏編號是：CCTCC?M 206022)生產9-蒽酮螺環內酯類化合物的方法；本發明還涉及該類化合物在制備細胞增殖抑 制劑或抗腫瘤劑中的用途。

背景技術：

本發明人曾經從灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus?glaucus?HB1-19)(保藏編號是：CCTCC?M 206022)液體發酵產物中發現具有明顯抗腫瘤活性的9-蒽酮內酯類化合物灰綠霉素A，在進 一步對灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus?glaucus?HB1-19)發酵條件進行優化的過程中，獲得具 有新穎螺環結構的9-蒽酮螺環內酯類化合物。研究發現所示9-蒽酮螺環內酯類化合物具有 細胞增殖抑制活性，目前尚未見對該化合物的化學結構及細胞增殖抑制活性的報道，因此 市場上也尚未見有與此有關的藥物。

發明內容：

本發明旨在提供一種結構獨特的具有抑制腫瘤細胞增殖作用，具有抗腫瘤活性的新化 合物。其結構式

式I???

其結構特征是：含螺環和不飽和內酯環的9-蒽酮螺環內酯，其中R-R₅為氫、氨基、 羥基、烷氧基、酰氧基或酰氨基。

本發明優選的式I化合物其中R-R₄為羥基、R₅為氫。

本發明的式I化合物可通過微生物發酵培養來獲取含有9-蒽酮螺環內酯類化合物的發 酵物，然后從發酵物中采用硅膠柱層析、制備HPLC等方法分離純化得到。

本發明的下述實施例中列舉了利用灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus?glaucus?HB1-19)(保藏 編號是：CCTCC?M?206022)制備本發明式I化合物的實例。

具體實施方式：

在如下的實施例中所指的化合物I的化學結構：

??化合物I

實施例1?化合物I的發酵生產及分離精制

1?發酵生產

生產菌的發酵培養：按培養微生物的常規方法，取灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus?HB1-19)(保藏編號是：CCTCC?M?206022)適量，接種到固體斜面培養基[將普通的 PDA培養基中的淡水換成人工海水，將土豆汁換成50g/L甘薯粉，其他成份不變]上，在 28攝氏度培養箱中培養4天。

用無菌水從灰綠曲霉孢子斜面上洗下孢子，制成孢子懸浮液，用血球計數板計數后， 每50ml種子培養基[人工海水、麥芽糖2％、甘露醇2％、葡萄糖1％、味精1％、酵母膏 0.6％、MgSO₄?0.03％、KH₂PO₄?0.05％]接種孢子數為10×10⁷個，28℃，175rpm，搖床培 養約40h，作為發酵種子。將發酵種子按14％～16％接種量接入裝有50ml培養基[人工海 水、可溶性淀粉4％、蔗糖4％、麥芽糖3％、蛋白胨0.2％、酵母膏0.1％、黃豆粉0.05％、 味精0.2％、MgSO₄?0.03％、KH₂PO₄?0.05％。可溶性淀粉先用沸水糊化后再加入培養基中] 的250ml發酵搖瓶中，28℃，175rpm，搖床培養7d左右，獲得菌絲體和發酵液。

2?浸膏的獲得

用棉布將菌絲體和發酵液分離。將菌絲體用丙酮浸提三次，減壓濃縮至不含丙酮，所 得水層用等體積乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，得粗浸膏。發酵液減 壓濃縮為四分之一體積后，用乙酸乙酯萃取三次，合并菌絲體和發酵液的浸膏，共41.0克。

3?化合物的分離精制

浸膏(41.0克)用氯仿-甲醇混合溶劑溶解后，加300克200-300目硅膠(青島海洋化 工集團公司產品)拌樣，減壓除去溶劑后，用硅膠柱層析，以石油醚、石油醚-氯仿，氯仿- 甲醇為溶劑進行梯度洗脫，分為7個流份。Fr-6(12.0g，氯仿-甲醇10：1洗脫物)，先后以 氯仿-甲醇(1：1)為溶劑進行LH20柱層析，再經加壓硅膠柱層析以石油醚：丙酮(5：5)為 溶劑，最后經半制備反相高效液相色譜(甲醇：3‰TFA水溶液＝70：30)得化合物I(200mg)。