[發(fā)明專利]一種生物堿化合物及其制備方法與作為酶抑制劑的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810138540.0
• 申請日: 2008-07-14
• 公開（公告）號: CN101307049A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發(fā)明（設計）人: 邵長倫;王長云;林永成;佘志剛
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07D413/12
• 分類號: C07D413/12;C12P17/16;A61K31/536;A61P43/00;C12R1/80
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司
• 代理人: 崔清晨

技術領域

本發(fā)明涉及一種具有新穎啞嗪環(huán)結構的生物堿類化合物，特別是涉及一類具有酶抑制活性的生物堿化合物及其制備方法與應用。

背景技術

自從1929年從真菌中制備出青霉素以來，真菌的代謝產物成為了藥物的豐富來源，絕大多數臨床應用的抗生素都來源于真菌和細菌。真菌的代謝產物還有其他的藥用價值，如抗腫瘤，治療心血管疾病，酶抑制劑等。由于海洋環(huán)境的特殊性，海洋真菌能提供陸生真菌無法提供的代謝產物，但目前尚未見到由海洋真菌獲得有藥用價值的酶抑制劑產品。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種來源于海洋真菌的生物堿化合物及其制備方法與作為酶抑制劑的應用，它能滿足現有技術的上述需求。

一種生物堿化合物，其特征在于它的結構式為

式中R₁為溴離子、R₂為；或R₁為氫離子、R₂為或或

上述生物堿化合物的制備方法，其特征在于先在培養(yǎng)基中對海洋真菌進行菌種培養(yǎng)，再在發(fā)酵培養(yǎng)基中對真菌進行發(fā)酵培養(yǎng)，然后將所得發(fā)酵液過濾，除去菌體，將濾液加熱濃縮，用乙酸乙酯萃取；萃取液濃縮后進行色譜分離，將所得洗脫液濃縮，得無色結晶，即為penicillazine；在溶有Penicillazine的溶液中，加入溴或二氧化錳，反應后分別得到Penicillazines?1和2；或者在溶有Penicillazine?2的溶液中，加入醋酸酐，反應后得到Penicillazines?3和4。

上述的生物堿化合物在制備酶抑制劑藥物中的應用。

本發(fā)明從海洋真菌中獲得了一個新的生物堿，并且對該化合物進行了化學修飾，具有酶抑制活性，能有效地抑制人拓撲異構酶I，可用于開發(fā)酶抑制劑藥物，并且原料可以進行大規(guī)模生產，不受資源限制，因此應用前景廣闊。

具體實施方式

本發(fā)明的化合物的制備

(1)真菌Penicillium?sp.386的菌種培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、瓊脂1.0％、氯化鈉0.3％，其余為水，使用時制成試管斜面，真菌菌株在30℃下培養(yǎng)5天。

所述的菌種培養(yǎng)基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、瓊脂0.1％-3.0％、氯化鈉0.05％-5％，其余為水。(2)真菌Penicillium?sp.386的發(fā)酵培養(yǎng)所用的發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、氯化鈉0.3％，其余為水，真菌菌株于28℃培養(yǎng)30天。

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、氯化鈉0.05％-5％，其余為水。

(3)化合物penicillazine的分離提取

將所得發(fā)酵液過濾，除去菌體；加熱濃縮后，用乙酸乙酯萃取5次，將所得萃取液濃縮后，進行層析分離，洗脫液濃縮得無色結晶，即為penicillazine。

(4)Penicillazine?1的制備

稱取上述干燥后的Penicillazine(0.1mol)溶解在冰醋酸中，冰浴條件下，在充分攪拌下將溴(0.2mol)逐滴滴加到反應溶液中，反應1小時后，向反應物中加入蒸餾水(200mL)來終止反應，用乙酸乙酯(500mL)進行萃取，將萃取液濃縮后，進行柱層析，用乙酸乙酯洗脫，洗脫液濃縮，重結晶后得到化合物Penicillazine?1。

(5)Penicillazine?2的制備

稱取干燥后的上述Penicillazine(0.1mol)溶解在干燥的丙酮(50mL)中，然后向其中加入新制的固體二氧化錳(100g)作為氧化劑，室溫條件攪拌反應24小時后，用TLC檢測，原料消耗完全后，將反應液過濾，濾出的固體氧化劑用丙酮充分洗滌，將過濾液與洗滌液合并，減壓濃縮后，進行柱層析，用乙酸乙酯與石油醚兩者體積比為0.5的洗脫液進行洗脫，將洗脫液濃縮后，重結晶得到化合物Penicillazine?2。

(6)Penicillazines?3和4的制備