[發明專利]一種豬鏈球菌2型表面細胞壁蛋白、其制備方法及用途

有效

• 申請號: 200810115511.2
• 申請日: 2008-06-25
• 公開（公告）號: CN101613400A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 耿紅冉;姜永強;鄭玉玲;張煒;李文君;袁媛
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/315
• 分類號: C07K14/315;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/569;A61K39/09;A61P31/04;C12R1/19
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技術領域

本發明涉及一種細菌蛋白，具體地說涉及一種豬鏈球菌的表面細胞壁蛋 白，還涉及該蛋白質的制備方法以及用途。

背景技術

豬鏈球菌(Streptococcus?suis)，屬于蘭氏分類法的R群，有35個血清型， 以豬鏈球菌2型流行最廣，致病性最強。自丹麥在1968年最早報道人感染豬鏈 球菌病后，20世紀70年代以來，歐美部分國家和香港地區均報道過豬鏈球菌 病例，主要以腦膜炎為主，中毒性休克綜合征(TSS)少見，未見暴發流行。 我國于1998年和2005年兩次在江蘇和四川暴發人感染豬鏈球菌2型疫情，不同 于國外人感染病例以腦膜炎為主的特點，臨床表現為休克型和腦膜炎型。多 數病例死于中毒性休克綜合征(TSS)，病理改變主要表現為全身多器官受損， 敗血癥伴彌漫性血管內凝血(DIC)。人豬鏈球菌病已成為嚴重威脅我國人民 健康的一種新的人畜共患病，如何有效地預防和控制豬鏈球菌感染已成為科 學家們面臨的重要研究難題。

由于對毒力因子和保護性抗原了解甚少，同一血清型的菌株在不同的地 區毒力也不盡相同，高致病性豬鏈球菌感染缺乏有效的診斷靶標：對該類病 原的分離鑒定主要依靠傳統的分離培養和生化鑒定，然后用豬鏈球菌高免血 清進行凝集試驗分型。但家畜廣泛攜帶鏈球菌，許多菌株毒力低，因此僅僅 靠生化反應檢測豬鏈球菌是遠遠不夠的，必須建立針對特異毒力因子的檢測 手段，以區分弱毒株和強毒株。以上情況都阻礙了有效的豬鏈球菌病疫苗的 研制及對感染的及時診斷與控制。

縱觀國外豬鏈球菌病疫苗的研制情況，主要經歷了全菌免疫和抗原蛋白 免疫兩個階段。上世紀90年代，有研究者以福爾馬林滅活的豬鏈球菌進行靜 脈注射能刺激被免疫豬產生調理化的抗體[Holt?ME，Enright?MR，Alexander TJ.(1990)Immunisation?of?pigs?with?killed?cultures?of?Streptococcus?suis?type?2. Res?Vet?Sci.48：23-7]。也有研究者通過篩選無毒力的豬鏈球菌突變體，如溫度 敏感性突變體、鏈霉素依賴性突變體等來獲得具有保護性的全菌疫苗[Kebede M，Chengappa?MM，Stuart?JG.(1990)Isolation?and?characterization?of temperature-sensitive?mutants?of?Streptococcus?suis：efficacy?trial?of?the?mutant vaccine?in?mice.Vet?Microbiol.22：249-57.Foster?N，Staats?JJ，Chengappa?MM. (1994)Isolation，characterization?and?protection?studies?in?mice?of?a streptomycin-dependent?mutant?of?Streptococcus?suis?type?1/2.Vet?Res?Commun. 18：155-63.]，但是滅活的全菌免疫常會引起免疫綜合征等副作用。后續有研究 者利用豬鏈球菌相關毒力因子溶菌酶釋放蛋白(MRP)、胞外因子(EF)結 合油包水型乳劑(WO)和氫氧化鋁佐劑(AH)作為疫苗，對其保護性和毒副作用 作了評價，發現用MRP+EF/WO免疫的豬與用全菌/WO免疫的豬具有同等有 效的抗-MRP和抗-EF滴度，而且在免疫后的存活豬中，沒有觀察到明顯的 臨床表征[Wisselink?HJ，Vecht?U，Stockhofe-Zurwieden?N，Smith?HE.(2001) Protection?of?pigs?against?challenge?with?virulent?Streptococcus?suis?serotype?2 strains?by?a?muramidase-released?protein?and?extracellular?factor?vaccine.Vet?Rec. 148：473-7.]。也有人用純化的溶血素(SLY)作為疫苗免疫小鼠，發現能對小 鼠產生完全保護作用，免受毒力株的傷害[Jacobs?AA，Loeffen?PL，van?den?Berg AJ，Storm?PK.(1994)Identification，purification，and?characterization?of?a thiol-activated?hemolysin(suilysin)of?Streptococcus?suis.Infect?Immun. 62：1742-8.]。但豬鏈球菌的毒力因子較常時間以來就呈現出時空上的相對多樣 性，雖然MRP、EF與毒力高度相關，但與歐洲致病株不同的是多數加拿大 致病株不表達MRP和EF，且MRP和EF的2-型豬鏈球菌缺失突變體與野生 型一樣同樣具備毒力[Gottshalk?M，Lebrun?A，Wisselink?HJ，Dubreuil?JD，Smith HE，Vecht?U.(1998)Production?of?virulence-related?proteins?by?Canadian?strains ofStreptococcus?suis?capsular?type?2.Can?J?Vet?Res?62：75-79.]。我國流行株和非 流行株都表達MRP，且動物實驗顯示流行株培養分泌的上清并不引起病變， 單靠現了解的MRP、EF、SLY等毒力因子不足以解釋我國2-型豬鏈球菌的致 病機理，使用MRP作為人免疫疫苗產生抗體中和MRP可能難以達到理想的 效果。而在國內，豬鏈球菌疫苗的研制還處于起步狀態，即滅活的全菌疫苗[王 卓，舒秀偉，王文成.豬鏈球菌病二價滅活疫苗候選株培養條件的優化及其安 全性試驗.(2004)中國藥獸雜志.38：34-36.]。因此有必要根據我國實際情況， 研制適合我國的2-型豬鏈球菌的新型疫苗，發掘新的具有免疫原性的毒力因 子是尋找新型疫苗的重要途徑。