[發明專利]桫欏孢子的保存方法

有效

• 申請號: 200810111904.6
• 申請日: 2008-05-19
• 公開（公告）號: CN101283642A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 石雷;李楊;李東
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及蕨類植物孢子的一種保存方法，特別涉及桫欏(Alsophilaspinulosa(Wall.ex?Hook.)Tryon)孢子的一種保存方法。

背景技術

全世界桫欏科(Cyatheaceae)植物約有6屬500余種，產于熱帶和亞熱帶的山地。絕大多數種類的桫欏科植物都具有樹狀的直立莖，呈喬木狀，大型羽狀葉子簇生于莖干的頂端，形成傘狀，故又稱為樹蕨。據化石記載，在地質歷史上桫欏科植物最早出現于中生代的早侏羅紀或晚三疊紀，在中生代中期曾廣泛分布，極為繁盛。后來由于地質變遷和氣候變化，特別是第四紀冰川期的影響，大量種類滅絕，分布區也大幅度收縮，因此常被人們稱為植物界的“孑遺種”、“活化石”。該科植物除了具有較高的園林觀賞價值，還可藥用，其根狀莖具有清熱解毒、驅風濕等功效；我國蘭花栽培者常用桫欏科植物的樹干作為附生蘭花的載體；此外，其有些種類的樹干還可制備筆筒，如筆筒樹(Sphaeropteris?lepifera)等。

目前桫欏的數量已經非常稀少，只有在中亞亞熱帶以南低海拔地區保存較好的常綠闊葉林的林緣才見生長，我國地處桫欏科植物分布地的北緣，種類不多，目前已知的僅有2屬14種和2個變種，主要分布于貴州、四川、廣東和臺灣等地。《國家重點保護野生植物名錄》將桫欏科所有種列為國家二級保護植物(國家林業局，農業部，1999)，其中桫欏(Alsophila?spinulosa(Wall.ex?Hook.)Tryon)被列為國家一級保護植物，在《瀕危野生動植物種國際貿易公約》中桫欏科所有種被列為附錄II物種(1975)。其瀕危的主要原因是種間遺傳多樣性降低導致了適應性和競爭力下降，加上人類活動的干涉以及其自然條件下孢子壽命短，孢子萌發、配子體的形成對環境條件要求嚴格。因此，需要對桫欏科植物進行人工繁殖，才能保護桫欏科植物和滿足實際需要。保護桫欏科植物的最佳途徑是通過組織培養，而如何長期保持孢子活性是其中的關鍵。

發明內容

本發明的一個目的是提供桫欏孢子的一種保存方法。

本發明所提供的桫欏孢子的一種保存方法，是將成熟的桫欏孢子置于液氮中避光保存。

其中，所述桫欏孢子在保存前可以先在室溫下干燥2-5天。

所述桫欏具體為桫欏(Alsophila?spinulosa(Wall.ex?Hook.)Tryon)。

實驗結果表明，利用本發明方法保存桫欏孢子，原萌發率為90％的孢子保存12個月后活力降低少。與其它現有保存方法相比，本發明方法具有簡便易行、占用較小空間、成本低廉、保存效率高的優點。本發明方法能更好地保持孢子結構的完整，并使其維持更高的活力。本發明方法彌補了孢子壽命較短給桫欏的繁殖和生物學研究帶來的困難，為開展該物種遺傳育種和保護生物學等方面的研究提供了便利。

附圖說明

圖1為-196℃保存時使用液氮罐。

圖2為-196℃保存時將孢子收集于紙包并存放于離心管中的示意圖。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明均為常規方法。

下述實施例中所用的桫欏孢子為桫欏(Alsophila?spinulosa(Wall.exHook.)Tryon)孢子。

下述實施例中所述的孢子都是采摘時具有相同成熟度的孢子。成熟度從孢子囊的顏色及開裂狀況判斷，桫欏成熟孢子囊呈深褐色，一個葉片上有少量幾個孢子囊開始裂開時采摘最好。

實施例1、孢子的收集及保存前孢子活力的檢測：

選取葉背面布滿棕褐色孢子囊群且大部分完整尚未開裂的孢子葉，從葉柄處剪下，展開分裝于潔凈紙袋中；隨機取其中的一部分成熟桫欏孢子，滅菌、制成孢子懸浮液，計數；在無菌條件下，先用無菌水將1/2MS培養基的表面濕潤，使其表面形成一層薄薄的水膜(以傾斜三角瓶時匯集在底部的水不能讓滴管吸上連續的水滴為宜)，然后用滴管將上述獲得的無菌孢子懸濁液均勻接種在培養基上，每個培養皿接種2滴，接種3個培養皿；接種后，在25±2℃下，先暗培養24h，然后將其轉至光照下繼續培養，光照強度為50μmol·m^-2·s^-1(光源為熒光燈)，光照時間為12h/d，培養30天；從培養皿中隨即選取400個孢子，分別統計萌發和未萌發的個數，計算萌發率，萌發率的計算公式為：萌發率＝萌發的孢子數目/400。

實驗重復3次，結果取其平均數。結果表明保存前孢子的萌發率為90％。

實施例2、桫欏孢子的保存及保存后活力檢測

一、20℃保存