[發明專利]一種可誘導癌細胞凋亡的載體及其應用

有效

• 申請號: 200810111626.4
• 申請日: 2008-05-15
• 公開（公告）號: CN101580845A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發明（設計）人: 蔣宇揚;謝振華;董愛君;劉華臣
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/79;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種可誘導癌細胞凋亡的載體及其應用。

背景技術

caspase-3是參與細胞凋亡信號通路中眾多半胱天冬酶的一種，正常情況下caspase-3以無活性酶原的形式存在于細胞漿中。當細胞在一系列內源性基因的調控下要發生凋亡時，處于細胞凋亡信號通路上游起始凋亡的半胱天冬酶便被激活，而caspase-3正是被這些上游的caspases激活，生成活化的caspase-3p17和p12亞基，兩種亞基再組裝成活性形式的caspase-3，發揮其執行凋亡的功能。所以caspase-3通常被認為是細胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶。

目前，雖然雙啟動子載體可用于兩個基因的協同表達，但是兩個基因往往會轉錄干擾和/或不同水平的表達，有時報告基因表達了但插入的目的基因不一定表達。

發明內容

本發明的目的是提供一種重組表達載體，該載體可同時表達兩個蛋白，這兩個蛋白可形成活性形式的caspase-3，進而激活細胞凋亡信號通路，促進腫瘤細胞凋亡。

本發明提供了轉錄融合雙基因片段K，自上游至下游依次為caspase-3P17亞基基因序列、IRES序列和caspase-3P12亞基基因序列。

所述caspase-3P17亞基基因序列是如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交且具有相同功能的DNA分子；

3)與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

所述IRES序列是如下4)或5)或6)的DNA分子：

4)其核苷酸序列是序列表中序列3所示的DNA分子；

5)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交且具有相同功能的DNA分子；

6)與序列表中序列3限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

所述caspase-3P12亞基基因序列是如下7)或8)或9)的DNA分子：

7)其核苷酸序列是序列表中序列2所示的DNA分子；

8)在嚴格條件下與1)限定的DNA序列雜交且具有相同功能的DNA分子；

9)與序列表中序列2限定的DNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的DNA分子。

上述嚴格條件可為在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

含有上述任一所述基因片段K的表達盒或重組表達載體均屬于本發明的保護范圍。

所述重組表達載體為真核表達載體。

所述載體中還可包含PBR322復制起點和/或氨芐青霉素抗性基因。

所述重組表達載體可按照基因工程領域的常規方法構建，如可按照如下方法構建PCRC：

所述PCRC是將IRES序列插入質粒PC1的caspase-3P17亞基基因序列和caspase-3P12亞基基因序列間得到的；

所述質粒PC1是將pcDNA3.1(-)的XbaI和BamHI位點間的小片段取代為caspase-3P17和caspase-3P12亞基基因序列得到的。

含有上述任一所述基因片段K的細胞系或重組菌也都屬于本發明的保護范圍。

所述重組表達載體、表達盒、細胞系和重組菌均可應用于制備誘導癌細胞凋亡的藥物或抗癌藥物。

本發明通過IRES將caspase-3P17亞基基因和caspase-3P12亞基基因融合形成轉錄融合雙基因，將該轉錄融合雙基因插入真核表達載體得到的重組表達載體可以在轉染細胞中高效地表達活性形式的caspase-3，從而激活細胞凋亡信號通路，促進細胞凋亡。將本發明的重組表達載體轉入癌細胞，可以有效地誘導腫瘤細胞的凋亡，為基因治療提供新的手段。本發明的重組表達載體可以用于制備誘導癌細胞凋亡的藥物或抗癌藥物。本發明將在生物醫藥領域及基因功能的研究中發揮重要作用，應用前景廣闊。

以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。

附圖說明

圖1為針對PARP的western?blot圖

具體實施方式