[發明專利]快速檢測人ABO/Rh/MN血型的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 200810111567.0
• 申請日: 2008-06-10
• 公開（公告）號: CN101603967A
• 公開（公告）日: 2009-12-16
• 發明（設計）人: 汪大明;楊文;肖江群;王保丹
• 申請（專利權）人: 英科新創（廈門）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明涉及快速檢測人類ABO/Rh/MN血型的方法及相應的試劑盒。

發明背景

血液分型方法是將人血液紅細胞分成A、B、AB和O四種不同類型以及Rh 血型系統和MN血型系統的常規方法。鑒定血型的一般方法是將受檢紅細胞與含 有血型抗體的試劑混合，兩者反應后，通過觀察紅細胞是否發生細胞凝集來判斷 被檢紅細胞的血型。此類方法是首先從病人血清中分離紅細胞。將適量的紅細胞 與引入試管中或玻片上的試驗溶液(含有抗A血清、抗B血清或者抗D血清或 者抗M血清、抗N血清)混和，可以另外加入利于免疫反應進行的其他試劑并 保溫、離心和攪拌。然后肉眼觀察，確定細胞是否發生了聚集。

如果樣品在抗A試劑存在下發生細胞聚集，而在抗B存在下不發生聚集即 鑒定為A型血。樣品在抗B試劑存在下發生細胞聚集，但在抗A存在下不發生 聚集則鑒定為B型血。樣品與抗A和抗B試劑均有聚集，樣品為AB型血。樣 品與抗A和抗B試劑均不發生反應則定為O型血。樣品與抗D試劑發生聚集的 為Rh陽性血型，樣品與抗D試劑不發生凝集的血樣為Rh陰性血型。MN血型 系統根據是否發生相應的凝集反應可以分為M、N和MN三種血型。

目前檢測人ABO/Rh/MN血型的技術可以分為兩類，一類是檢測細胞膜上結 合的血型抗原，包括紅細胞鹽水凝集法、中和實驗、吸收實驗、解離實驗和混合 凝集反應等。另一類是直接檢測游離血型抗原，包括協同凝集反應、放射免疫反 應等。

目前常用的紅細胞鹽水凝集法是通過已知的IgM或IgG型抗體結合新鮮紅 細胞表面的血型抗原，導致紅細胞凝集，進而判斷被檢血液的血型。此方法被廣 泛用于臨床輸血前的血型檢驗(配型)。然而，這種方法需要相應的配套試劑， 而且試劑需要低溫保存，結果也難以判斷。

其他血型檢測方法也都存在各自的缺點，例如中和實驗方法費時較長，而 且靈敏度比較低。解離實驗和混合凝集反應法操作要求高，每次實驗需要反復摸 索條件，其靈敏度也不高；協同凝結反應方法是用IgG型抗體致敏金黃色葡萄球 菌A蛋白(SPA)，通過觀察葡萄球菌是否凝集來判斷被檢樣品的血型，但該方 法對試劑保存要求較高；放射免疫和酶聯免疫方法雖然靈敏度高，但是費時較長、 不適合單人份檢測，也無法進行現場檢測。

總之，目前常用的臨床血型鑒定方法存在檢定時間長、手工勞動強度大，以 及結果受主觀偏差影響較大和存在污染的可能等問題。因此，有必要對傳統的血 型檢測方法做出實質性的改進。

發明內容

本方法的一個目的是提供一種檢測人ABO/Rh/MN血型的方法，該方法包括 將被測血樣滴加在預先包被固定了抗A或抗B或抗D或者抗M或者抗N血型 抗體的測試條上，在測試條的一端滴加沖洗液后，使未與抗體發生凝集反應的紅 細胞在沖洗液的泳動下遠離加樣點處，而與抗體發生免疫凝集的紅細胞被殘留在 加樣點處，然后即可根據反應位點是否有凝集的紅細胞殘留來判定被測樣品的血 型。

根據本發明的一個優選實施方案，其中測試條上滴加的待測血樣的體積可以 小至1-10μl。所說的沖洗液是10mM磷酸鹽緩沖液(PBS)、生理鹽水或者其他 溶液。所說的待檢血樣是滴加在檢測試劑條的加樣墊上。

根據本發明的一個優選實施方案，其中所說的固定血型抗體的方法可以是物 理吸附或者化學交聯等方法。

根據本發明的一個優選實施方案，其中所說的待測血樣可以是紅細胞或者全 血或者是用生理鹽水、磷酸鹽緩沖液等等張溶液稀釋的紅細胞或全血懸浮液。并 且所說的血樣也可以包括部分溶血或者高血脂含量的血樣。

根據本發明的一個優選實施方案，其中檢測結果的判斷可以是肉眼觀察或者 利用光學信號或者電信號采集儀器進行判斷。

簡單地說，當血液樣品與結合了相應的血型抗體的加樣墊接觸并反應后，即 在加樣墊上與相應的抗體發生免疫結合反應。用沖洗液體沖洗之后，發生了免疫 結合反應的樣品即在加樣墊上殘留顯著的紅色物質，而沒有發生免疫結合反應的 血樣則被沖洗液沖洗而離開加樣墊，加樣點處便沒有紅色物質殘留。從而可根據 紅細胞與相應抗體發生免疫反應后，加樣墊上是否有紅色物質的殘留來判斷紅細 胞是否和血型抗體發生了免疫反應，進而判定血液樣品的ABO/Rh/MN血型。