[發明專利]一種復頻組合超聲強化雙酶提取肝素鈉技術

有效

• 申請號: 200810107046.8
• 申請日: 2008-08-29
• 公開（公告）號: CN101343645A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發明（設計）人: 羅時通
• 申請（專利權）人: 羅時通
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明內容

本發明涉及一種肝素鈉技術，尤其是一種復頻組合超聲強化雙酶提取肝素 鈉技術背景技術。

背景技術

目前我國生產幾乎全部采用豬小腸為原料，在常規反應器內運用鹽解法、 堿解法和酶解法等幾種，其中鹽解法應用最為普通，其生產工序是：原料(腸 黏膜)、常規反應器內鹽水提取、過濾、樹脂吸附、洗脫、乙醇沉淀、脫水、干 燥、肝素鈉粗品。

上述方法生產肝素鈉的工藝過程雖然比較簡單易于實現，但存在的不足之 處在于過程的精致，因為粗品肝素鈉經反復的酸堿處理，不僅會使肝素鈉的收 率減少，而且對肝素鈉的生物活性也影響很大，尤其效價很難達到90USPu/mg 以上，并且時間較長。

發明內容

本發明的目的是在于提供一種雙酶法提取肝素鈉的制備方法，利用雙酶組 進行酶促提取肝素納，通過選擇酶的種類、酶組合的比例、超聲場的強度、控 制好時間以及其他幾道工序制成肝素鈉。

該方法采用以下步驟：

(a)、將刮制好的小腸粘膜抽入常規酶解罐，在加溫前先加入重量比為 2.3％-2.8％的精鹽，調PH值到9.0-9.2；

(b)、將步驟(a)中的溶液加溫到40℃-45℃時加入胰蛋白酶和脂肪酶，并 且使其比例在10：0.5到10：5之間，雙酶在步驟(a)中溶液的重量比為0.3％-0.4％， 繼續加溫到50℃-55℃，保溫酶解2h-5h，然后繼續加溫到80℃-85℃，保溫10-20 分鐘后過濾；

(c)、對步驟(b)中的過濾溶液進行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥 常規步驟后獲得肝素鈉產品。

所述的步驟(a)中，還可將將刮制好的小腸粘膜抽入復頻超聲反應罐，復 頻超聲條件為20+40kHZ，選擇超聲強度在0.1W/m²到0.9W/m²。所述的步驟(b) 中，所選擇的胰蛋白酶和脂肪酶的優選比例為10：2。所述的步驟(b)中，所 選擇保溫酶解的優選時間在2h。復頻超聲反應罐所選擇的超聲強度優選為 0.3W/m²到0.7W/m²。

本發明與現有技術相比，具有如下優點：

1、整個工序的時間減少了大概33％；

2、產品的收率提高了29.6％；

3、效價穩定在120以上(國內先進技術產品效價90-110)。

具體實施方式

實施例1

制小腸粘膜(10副小腸)，每根小腸與水混合后約4-6公斤，將刮制好的小 腸抽入常規酶解罐，在加溫前先加入2.3-2.8％(體量)的精鹽，調PH值9.0-9.2； 在42℃時加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10：2)，占總溶液重量比為0.4％；繼 續加溫至52℃，保溫3小時后進行酶解，然后繼續加溫到80℃-85℃，保溫15 分鐘后過濾，對上述步驟中的過濾溶液進行吸附：吸附水過濾，冷卻到58℃時 加入樹脂吸附；洗滌：收集樹脂，清水漂洗數次，再用清水加溫58-60℃，調PH 到7.5，到樹脂洗干凈為止，用1.2N鹽水溶液，調PH到8加入樹脂中，加溫到 60℃，洗滌0.5h，去處洗滌溶液，濾干樹脂；洗脫：用4M的NaCl溶液洗脫2 次后，將兩次洗脫溶液合并，過濾；沉淀：將一、二次洗脫液用85％的乙醇沉 淀，體積比例是1：1.5左右，兌好后的酒精混合液濃度大約是30-40度，沉淀 后脫水干燥得肝素鈉產品。

常規酶解罐內酶解法雙酶的各比例下所得肝素鈉的比例圖